FQ-PCR和TRFIA联合检测乙肝标志物的应用探讨.pdf

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1、医技与临床Yijiyulinchuang《中外医学研究》第11卷第24期(总第212期)2013年8月FQ—PCR~I：ITRFIA联合检测乙肝标志物的应用探讨马洪熹①周淑贤①黄晓①杨怡艳①【摘要】目的：探讨FQ—PCR和TRFIA两种方法联合检测乙肝标志物的临床意义。方法：用荧光聚合酶链反应(FQ—PCR)对患者进行HBV-DNA检测，同时用TRFIA法定量测定HBsAg、抗一HBs、HBeAg、抗一HBe、抗一HBc指标。结果：在1159例患者血清中检测出HBV—DNA病毒基因拷贝值范围为1．2X102～1．1×1081u，ml，平均

2、含量为3．65×106]U／ml，总阳性检出率为52．3％；其中HBsAg(+)、HBeAg(~、抗一HBc(+)血清中HBV—DNA阳性检出率93．8％(591／63o)；HBsAg(+)、抗一HBe(+)、抗一HBc(+)血清中HBV—DNA阳性检出率43．2％(401／929)；HBsAg(+)、抗一HBc(+)血清中HBV—DNA阳性检出率80．0％(104／130)；HBsAg(+)、HBeAg(+)血清中HBV—DNA阳性检出率96．0％(24／25)；HBsAg(-)血清中HBV—DNA阳性检出率为7．8％(39／501)。

3、结论：FQ—PCR可以检测HBV的真实感染和复制状态，TRFIA是一种效果好、准确度高、灵敏度高、特异性强、测量精度良好的自动化免疫分析方法，两种方法联合检测综合分析乙肝标志物含量，对判断患者的病情、检测感染状况及病毒的活跃程度都会具有较高的临床意义。【关键词】乙型肝炎病毒；荧光定量聚合酶链反应；时间分辨荧光免疫定量检测中图分类号R512．6文献标识码B文章编号1674—6805(2013)24—0068-02据世界卫生组织(WHO)公布的数据，乙型肝炎病毒(HBV)血清中，DNA阳性率为7．8％(39／501)；抗-HBs(+)、HBe

4、Ag(+)、感染已呈世界性流行，是一个全球性的公共卫生问题。目前，抗_HBe(+1、抗-HBc(+)标志物中DNA阳性率分别9．0％(28／312)、全球20亿人已感染，其中3．5～4亿人为慢性HBV携带者。HBV93．9％(615／655)、34．5％(433／1254)、57．2％fl125／1966)。(2)HBsAg和感染可以引起急性和慢陛肝脏疾病，包括肝硬化和肝癌【l】。HBeAg同时阳性组合中，DNA阳性率为93．9％(615／655)。根据我国属于HBV感染的高发区，资料表明全国约有1．2亿病HBV—M阳性组合分类进行分组，

5、其中I组HBV—DNA阳性率与毒携带者，3000万例慢性乙型肝炎患者，每年死于肝炎及其并Ⅱ组进行比较，I组HBV—DNA阳性率高于Ⅱ组，差异有统计学绑发症的患者达数十万人圆。HBV标志物检测既是临床感染诊断意义(=16．45，P<0．01)。的基础，更是抗病毒治疗检测和预测的重要指标。本文采用荧表1HBV—DNA定量结果与HBV—M结果对比光聚合酶链反应fFQ—PCR)检测HBV—DNA的含量，同时利用时阳性率间分辨荧光免疫技术(TRFIA)对乙型肝炎标志物(HBV—M)进行(％)定量检测，探讨用两种方法联合检测的临床意义，现报告如下。1

6、资料与方法1．1一般资料2215例均为笔者所在医院2007—2012年同时采用FQ—PCR和TRFIA法检测的门诊和住院患者，男1398例，女817例，年龄10—78岁。茄1．2方法1．2．1HBV—DNA含量检测FQ—PCR法：PCR仪是DA7600荧光PCR检测仪，试剂由达安基因诊断中心提供，并严格按照说明书进行操作，阳性标准为大于1×102IUlml。严格按照Kword等提出的防污染措施进行实验操作。1．2．2HBV—M定量检测TRFIA法：采用Anytest2000时间分辨荧光检测仪及配套试剂，试剂由上海新波生物技术有限公司提供。

7、阳性标准为：(1)HBsAg>0．2ng／ml；(2)抗一HBs>10mlU／ml；注：以HBsAg为1，抗一HBs为2，HBeAg为3，抗一HBe为4，抗一HBc(3)HBeAg>0．5NCU／ml；(4)抗一HBe>0．2NCU／ml；(5)抗一HBc>0．9为5；同II组比较，P<0．01Ncu，m1。操作步骤按说明书进行。3讨论1-3统计学处理荧光定量聚合酶链反应是在定性PCR基础上，添加一条荧结果采取PEMS3．1统计学软件处理，计量资料进行t检验，光探针，且标记荧光报告基团(R)和荧光淬灭基团(Q)两个基团。而计数资料采用检验

8、，P