胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞增殖的影响.doc

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1、胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞增殖的影响【摘要】目的：研究胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖的影响。方法：采用细胞计数和MTT法观察不同稀释度胎盘多肽作用72h后，ECV-304细胞增殖情况。同时以免疫组织化学法检测不同稀释度胎盘多肽对ECV-304细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果：一定稀释度的胎盘多肽可促进ECV-304细胞的增殖，25ml/L即可发挥作用，200ml/L作用最明显。ECV-304细胞PCNA表达阳性率与胎盘多肽稀释度呈剂量相关性。结论：胎盘多肽可促进体外培养的ECV-304细胞增殖。【关键词】胎盘；细胞计数；免疫组

2、织化学；胎盘多肽；内皮细胞［Abstract］Objective:Toinvestigatetheeffectsofplacentapolypeptideontheproliferationofhumanumbilicalveinendothelialcell(ECV-304)invitro.Methods：ECV-304cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofplacentapolypeptide,andtheECV-304proliferationwasobservedwithcytometry,andMTTin72

3、h.Proliferatingcellnuclearantigen(PCNA)wasobservedwithimmunohistochemistrymethodatthesametime.Results：intherangeof25~400ml/L,placentapolypeptideshowedeffectonECV-304proliferationinvitroinadose-dependentmannerandthemaximaleffectshowedat200ml/L.PositivePCNAexpressionofECV-304correlatedwith

4、placentapolypeptideconcentrationsused.Conclusion：PlacentapolypeptidecouldpromotetheproliferationofECV-304invitro.［Keywords］placenta;cellcount;immunohistochemistry;placentspolypeptide;endothelialcell　　近年来，随着人们对胎盘研究的逐步深入，胎盘的加工从简单的烘干与水煮发展到生物萃取，使人们对胎盘所含的生物活性物质及其功能有了更深入的认识［1］。2007年3~10月通过测定胎盘

5、多肽注射液对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖可能产生的影响，为进一步研究利用胎盘多肽对血管内皮进行修复做初步的探讨。1材料与方法1.1材料1.1.1胎盘多肽注射液贵州益康制药有限公司惠赠。批准文号：国药准字H20046260，4ml/支。31.1.2细胞株ECV-304购自中科院上海细胞生物学研究所。1.1.3主要试剂RPMI1640培养液（美国Gibco公司）；胎牛血清（杭州四季青公司）；MTT和二甲亚砜（国产分析纯）。增殖细胞核抗原PCNA免疫组化试剂盒（北京博奥森生物技术有限公司）。1.1.4仪器二氧化碳培养箱（美国FORMA公司）、倒置相差显微镜（日本NI

6、KON公司）、酶联免疫检测仪（美国Bio-Rad公司)。1.2方法和步骤1.2.1药物及细胞处理将胎盘多肽注射液用含0.4%胎牛血清的RPMI1640培养液稀释成下列稀释度：200、100、50、25、12.5ml/L。4℃保存备用。ECV-304培养至单层，细胞处于对数生长期备用。1.2.2细胞计数取对数生长期的ECV-304细胞，0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血清的RPMI1640制成细胞悬液，以8×104/ml接种于96孔板，每孔100μl。待细胞贴壁后换成含不同稀释度胎盘多肽注射液的维持培养液（含0.4%胎牛血清）,并设对照，每个稀释度做3个复孔。置于37

7、℃,5%CO2培养箱培养。加药后72h各剂量组做细胞计数,重复实验3次。1.2.3MTT比色法取对数生长期的ECV-304细胞，0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血清的RPMI1640制成细胞悬液，以8×104/ml接种于96孔板，每孔100μl。待细胞贴壁后换成含不同稀释度胎盘多肽注射液的维持培养液,每个稀释度3个复孔。培养72h后每孔加入10μlMTT(5ml/L),置37℃,5%CO2培养箱培养4h后,弃培养上清液,每孔加入100μlDMSO,振荡器振荡10min，酶联免疫检测仪进行检测，参比波长490nm，实验重复3次。1.2.