达肝清颗粒提取工艺的研究

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1、达肝清颗粒提取工艺的研究作者：吴玉强，邓家刚，王志萍，冯旭【摘要】　　目的优选达肝清颗粒最佳的提取工艺。方法采用正交实验法，以人参皂苷Rg1含量及干膏率作为评价指标，筛选最佳的提取工艺。结果达肝清颗粒最佳提取工艺为：药材加10倍量水提取2次，1h/次，第1次提取前先将药材浸泡1h。结论优选出的达肝清颗粒的提取工艺稳定合理可行。【关键词】达肝清颗粒；提取工艺；正交设计；人参皂苷Rg1病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的常见传染病，我国病毒性肝炎发病数位居法定管理传染病的第一位，仅慢性乙型肝炎病毒携带者就

2、达亿［1］。慢性乙型肝炎病程迁延，如得不到及时的治疗，将会发展为肝硬化甚至肝癌，严重危害人类健康［2］。达肝清颗粒原方系长期用于临床实践的经验方——达肝清汤剂。其由广西特色药材绞股蓝、三姐妹、黄根等7味药组成,具有清热解毒、益气健脾、利湿等功效。现代药理研究表明达肝清有保肝降酶、抗乙肝病毒、提高免疫功能［3］、抗肝纤维化［4］的作用。为了将达肝清汤剂更好地应用于临床上，广西中医学院研究开发出服用、携带方便的达肝清颗粒剂，并对其制备工艺进行了研究。现报道如下。　1仪器和材料仪器与设备RE-52A旋转

3、蒸发仪；Agilent1100高效液相色谱仪；HB43水分测定仪。材料绞股蓝、三姐妹、黄根等多味药材均购自南宁市日益旺中草药材经营部，经鉴定为正品。人参皂苷Rg1标准品购自中国药品生物制品检定所。　2方法与结果.1考察指标的确定达肝清颗粒处方中有多味药材，有效成分众多，因此以干膏率作为考察指标之一较全面合理，君药绞股蓝的主要有效成分为人参皂苷Rg1，故将人参皂苷Rg1作为考察指标。.2　考察指标的测定方法.干膏率的测定方法按处方比例称取黄根、三姐妹等药材适量，共9份，根据L9(34)正交实验设计表

4、，将药材浸泡适当时间后提取。提取完毕后浓缩到密度/ml(60～70℃)，醇沉(水提液∶95%乙醇=1∶2，醇沉2h)，弃去沉淀，得醇沉液，测量其体积，备用。将不同条件下的水提液分别浓缩至相对密度为，称重。称取g，分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，并于105℃干燥至恒重，取出，置于干燥器中放置30min，迅速精密称定干膏重量。　　干膏率=干膏重×浓缩液总重取样量×生药总量×100%.人参皂苷Rg1的测定方法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相；检测波长为20n

5、m。柱温为35℃，流速为1ml/min，理论塔板数按绿原酸峰计应不低于000。　　对照品溶液的配制：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇溶解，制成每毫升含人参皂苷的溶液，即得。　　供试品溶液的配制：精密量取50ml醇沉液放入蒸发皿中，水浴蒸干，加30ml水溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，30ml/次，合并萃取液，再用氨试液(氨水∶水=1∶)洗两次，40ml/次，蒸干正丁醇，加适量甲醇溶解，将甲醇液移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。取部分溶液离心20min，即得。　　测定法：分别精密吸取对照品溶

6、液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定其峰面积，计算人参皂苷Rg1含量。.3正交实验法优选提取工艺.实验设计选择对提取效果有重要影响的3个因素作为考察因素，每个因素选取3个水平，编制4因素3水平表。见表1。表1水提工艺因素水平.正交实验安排及结果按处方的一定比例称取药材，根据L9(34)正交表安排，分别以干膏率、人参皂苷Rg1含量为考察指标进行试验。结果见表2～4。液相图见图1～2。表2L9(34)正交实验安排和结果，表3方差分析，表4方差分析。　　从以上方差分析结果可以看出：以干膏率为评价

7、指标时，A，B因素有显著性影响，影响因素顺序为：B>A>C，且A2，B2，C3最佳，所以最佳工艺为A2B2C3；以人参皂苷Rg1为评价指标时，B因素有显著性影响，影响因素顺序为：B>A>C；且A2，B2，C3最佳，所以最佳工艺为A2B2C3。综合比较上述结果，由于C因素各水平间的差异不显著，从实际生产节约时间和节约能源考虑，B因素选第2水平，A因素选第2水平，C因素选第2水平，即A2B2C2。即加10倍量水提取2次，1h/次，第1次提取前先将药材浸泡1h。.4最佳提取工艺验证为了进一步验证正交试验

8、结果的准确性，以确保提取工艺合理可行，按上述工艺条件A2B2C2，重复安排3批试验。结果见表5。表5水提工艺验证结果　3讨论　　采用正交设计，确定了水提工艺的最佳条件，即：即称取水提取部分药材，加入药材量10倍体积的水，加热提取两次，1h/次。其中第1次提取前先将药材浸泡1h。验证试验结果表明提取工艺稳定。【参考文献】　　［1］崔玉,詹林盛.乙型肝炎病毒动物模型研究进展［J］.生物技术通讯,007,18(2):307.　　［2］中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝