多药耐药相关蛋白在人肝细胞癌亚群细胞中的表达及意义_论文

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1、多药耐药相关蛋白在人肝细胞癌亚群细胞中的表达及意义【摘要】目的检测肝细胞癌异质性亚群细胞对化疗药物的耐药差异，探讨耐药蛋白在肝癌组织中不同亚群细胞的表达意义。方法①通过MTT法分别测定人肝细胞癌异质性亚群细胞在不同浓度、不同化疗药物（ADM、VP-16、DDP）作用下的抑制率，计算每种药物IC50值。②应用流式细胞仪分别检测耐药相关蛋白MDR1、MRP、LRP、GST在两亚群细胞中的表达率。结果①LCSC-1和LCSC-2亚群细胞对阿霉素（ADM）、顺铂（DDP）、鬼臼乙叉苷(VP-16)等药物都产生了耐药性（F＝）。三种药

2、物对LCSC-2亚群细胞和LCSC-1亚群细胞抑制率有显著差异(P【关键词】肝细胞癌异质性亚群细胞多药耐药AbstractObjectiveTostudytheexpressionandsignificanceofmultidrugresistance-associatedproteininhumanHCCheterogeneoussubpopulationscells.Methods①Resistanceofsubpopulationscells(LCSC-1andLCSC-2)todifferentchemotherap

3、euticdrugs(ADM,VP-16,andDDP)andtheIC50valuesofeachdrugaremeasuredusingMTTmethod.②NumberofpositivecellsofMDR1,MRP,LRP,GSTrelatedto11/11drugresistancearemeasuredusingflowcytometry,andtheaveragelevelofexpressionofdrug-resistantproteinsofeachsubpopulationscellsiscalcul

4、ated.Results①BothsubpopulationsshowedresistanceagainstADM,DDP,andIC50valuesofthesedrugstoLCSC-2arehigherthanthosetoLSCS-1(F=).ThisresultsuggestsahigherdrugresistanceofLCSC-2subpopulation(PKeywordsHepatocellularcarcinomasHeterogeneoussubpopulationscellsMultipledrugr

5、esistance肿瘤细胞对细胞毒药物的耐药是影响肿瘤病人化疗疗效的一个重要因素，人类多药耐药（multi-drugresistance，MDR）基因及其基因产物在肿瘤的多药耐药性中起着重要作用［１～3］。我们通过原代肝细胞癌细胞培养，克隆分离出了两种不同形态、不同生物学特性及不同成瘤能力的肝细胞癌亚群细胞。本研究通过检测化疗药物对这两种亚群细胞生长的抑制程度及多耐药基因在两种亚群细胞中的表达水平，来探讨HCC组织中MDR基因表达与肿瘤的生物学特性和患者预后之间的关系，为临床预测化疗疗效、指导合理用药提供理论依据。1材料与方

6、法材料11/11LCSC-1和LCSC-2亚群细胞：取材于同1例原发性肝细胞癌手术标本组织，通过原代细胞培养，采用有限稀释法克隆分离出经鉴定具有不同形态和生物学特征的两种细胞亚群，并且两种亚群细胞的致瘤性也不相同［4］。主要试剂：DMEM、胎牛血清（FBS）、谷氨酰胺、青霉素、链霉素为美国Gibco公司产品；胰蛋白酶为Sigma公司产品；MTT、小鼠抗MDR1抗体、小鼠抗MRP抗体、小鼠抗LRP抗体、小鼠抗GST抗体、FITC标记兔抗小鼠IgG抗体为北京中山公司产品。方法细胞培养方法人肝细胞癌LCSC-1、LCSC-2亚群细

7、胞置于温度为37℃含5%CO2气体的培养箱中，选用含10%胎牛血清的DMEM培养基，常规培养两种亚群细胞。MTT法检测化疗药物对人肝癌细胞亚群生长的抑制效应实验分组：用不含血清的DMEM培养基倍比稀释化疗药物阿霉素（ADM）、顺铂（DDP）、足叶乙甙(VP-16)3种药物，参照各药临床用量的血峰浓度，以每种单药的不同浓度分组，分别加入，终浓度为：ADM、、、、μg/ml，DDP、、1、10、100μg/ml，VP-16、、10、100、200μg/ml，上述药物每种浓度设3个复孔。同时设3个复孔不加药作为阴性对照。MTT法检

8、测化疗药物对细胞生长的抑制作用11/11：人肝细胞癌LCSC-1、LCSC-1亚群细胞，以每孔100μl细胞悬液（含有1×105细胞）接种于96孔培养板，贴壁24h后更换培养液。按实验分组分别处理细胞。加药组:肿瘤细胞悬液100μL/孔，抗癌药10μL/孔，培养液90μl/孔。阴性对照组不