多药耐药相关蛋白在卵巢上皮癌的表达及其临床意义

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多药耐药相关蛋白在卵巢上皮癌的表达及其临床意义【摘要】目的探讨多药耐药相关蛋白在不同卵巢上皮癌组织中的表达及与卵巢上皮癌化疗效果的关系。方法采用SP免疫组化方法联合检测多药耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、谷胱苷肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药相关蛋白(LRP)等在36例卵巢上皮癌组织中的表达情况，取同期卵巢良性肿瘤及交界性肿瘤各10例作为对照组。结果卵巢上皮癌组织P-gp、GST-π和LRP阳性表达率与良性和交界性肿瘤之间比较差异均有统计学意义(均P<0.01)，良性与交界性肿瘤之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。P-gp和LRP在卵巢上皮癌组织中的阳性表达率随其临床分期及病理分级的升高而升高(P<0.01);GST-π的阳性表达率在临床分期I～II期与III～IV期之间比较差异有统计学意义(P<0.01)，但在病理分级G1、G2与G3之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。P-gp、GST-π和LRP在卵巢上皮癌的阳性表达率与化疗疗效呈负相关(P<0.05)。结论卵巢上皮癌组织中存在原发的多个耐药相关蛋白共同表达的现象，联合检测卵巢上皮癌组织多药耐药相关蛋白，对化疗药物的选择及预后判断有一定临床指导价值。【关键词】卵巢癌;耐药;P-糖蛋白;谷胱苷肽-S-转移酶;肺耐药相关蛋白;免疫组织化学8 肿瘤细胞对化疗药物的耐药是多种耐药基因参与的结果。化疗是卵巢上皮癌主要辅助治疗方法，了解卵巢上皮癌耐药基因的表达，对选择合适治疗方案和实施有效的逆转措施具有重要意义。本文通过检测多药耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、谷胱苷肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药相关蛋白(LRP)在卵巢上皮癌组织中的表达，探讨其对化疗药物的选择及预后判断的临床指导价值。　　1材料与方法　　1.1临床资料2002年1月-2004年12月我院妇产科收住卵巢上皮癌患者36例，年龄27～69岁，平均(51±8)岁。36例均为初次手术，行卵巢癌分期手术或肿瘤细胞减灭术，术前未接受任何治疗，所有标本均经手术病理证实，其中浆液性囊腺癌18例，黏液性囊腺癌10例，子宫内膜样癌8例。病理分级：Ⅰ级7例、Ⅱ级11例、Ⅲ级18例。FIGO分期(1986)：Ⅰ期7例、Ⅱ期4例、Ⅲ期22例、Ⅳ期3例。血CA125均>35U·mL-1，其中11例>500U·mL-1，术后辅助PC或TP方案化疗，定期来院随诊检查或电话随访32例，失访4例。随访时间54～90个月，随访内容包括临床症状、妇检、血CA125、超声检查或MRI检查等。取同期卵巢良性肿瘤及交界性肿瘤各10例为对照组。　　1.2方法标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μ8 m切片，分别行HE染色核实诊断和SP法免疫组化方法。试剂盒由福州迈新公司提供，鼠抗人P-gp、GST-π和LRP为美国Maix公司产品，为即用型抗体。染色步骤按操作说明书进行DAB显色，PBS代替一抗作阴性对照，相同染色条件下已知阳性片作为阳性对照。结果判断标准：根据福州迈新生物技术开发公司提供的恶性肿瘤多药耐药免疫组化检测耐药判断标准，在低倍镜(10×10)视野下选择阳性细胞密度最大的区域，然后在高倍镜(10×40)下计数500个肿瘤细胞的阳性个数，连续5个视野，肿瘤细胞膜、细胞质、胞核、核膜出现黄棕色颗粒为阳性，不染色为阴性。计数阳性细胞数占细胞总数的百分比，阳性以“+”表示，阳性细胞表达率<10%为阴性，10%～25%为“+”，26%～75%为“++”，>75%为“+++”。　　1.3临床化疗疗效判定标准对化疗反应的评价参考WHO标准，观察3个疗程。临床完全缓解(CR)：临床症状消失，盆腔检查及超声检查均无包块，血清CA125值下降至正常;临床部分缓解(PR)：临床症状消失，病灶缩小>50%，无疾病进展表现，血清CA125较术前明显下降，但未达正常;临床无效(NR)：临床症状存在，病灶缩小≤50%，盆腔检查有包块，病灶增大或复发，血清CA125值未下降或下降后又再升高，或病情在3个月内急剧加重，视为无效。CR及PR视为临床治疗有效，NR视为临床治疗无效。　　1.4统计学方法采用SPSS软件进行χ8 2检验及四格表确切概率法分析。　　2结果　　2.1P-gp、GST-π和LRP在不同性质卵巢上皮肿瘤组织中的表达见表1。表1P-gp、GST-π和LRP在不同性质卵巢上皮肿瘤组织中的表达(例数，%)　　如表1所见，交界性肿瘤组各指标阳性表达率与良性肿瘤组比较差别无统计学意义(χ2P-gp确切概率法，χ2GST-π0.392，χ2LRP确切概率法，均P>0.05);卵巢上皮癌组与良性肿瘤组比较差异有统计学意义(χ2P-gp确切概率法，χ2GST-π17.17，χ2LRP确切概率法，均P<0.01);卵巢上皮癌组与交界性瘤组比较各指标阳性表达率亦均有明显统计学意义(χ2P-gp8.18，χ2GST-π13.06，χ2LRP10.13，均P<0.01)。　　2.2P-gp、GST-π和LRP在不同临床分期及病理分级的卵巢癌组织中的表达见表2。表2P-gp、GST-π和LRP在不同临床分期及病理分级的卵巢癌组织中的表达(例数从表2可见，P-gp和LRP在卵巢上皮癌组织中的阳性表达率随着其临床分期及病理分级的升高而升高(P<0.01)，GST-π的阳性表达率亦随临床分期升高而增高(P<0.01)，但GST-π8 在各个病理分级的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。　　2.3P-gp、GST-π和LRP在卵巢癌组织中表达与化疗疗效的关系见表3。　　从表3可见，在卵巢癌患者中，P-gp、GST-π和LRP表达阳性组，其化疗有效率低于表达阴性组(P<0.05)，三种多药耐药相关蛋白的表达阳性率与化疗有效率呈负相关。　　3讨论　　卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤，目前对卵巢癌的治疗原则仍以手术为主，辅以化疗综合治疗。以铂类为主的联合化疗提高了卵巢癌患者的总体反应率、临床缓解率和中位生存率，但随之而来的肿瘤细胞的原发性和(或)获得性多药耐药现象成为临床治疗的障碍。卵巢癌耐药是临床治疗最为棘手的问题，因此，探索耐药机制是解决耐药问题、改善化疗效果的关键[1]。多药耐药是恶性肿瘤存在的普遍现象，其耐药机制是复杂的，是多种基因共同参与的结果。膜药物排流泵对药物的主动排出、肿瘤细胞解毒能力的增强以及药物靶酶活性的改变均构成了肿瘤细胞耐药的分子基础。表3P-gp、GST-π和LRP在卵巢癌组织中表达与化疗的疗效关系(例)　　化疗P-gp阳性阴性GST-π阳性阴性LRP阳性阴性有效9111471010无效133150142χ2值4.92—8 5.63P值<0.050.03<0.05P-gp是多药耐药基因MDR的表达产物，为一能量依赖型药泵，能将多种结构和作用机制不同的天然药物如多柔比星、紫杉醇、长春新碱类药物排出细胞外，使胞内药物蓄积浓度下降，从而阻碍化疗药物作用的发挥，其表达水平与耐药程度成正相关[1]。本研究结果提示随着卵巢上皮癌手术分期及病理分级的升高，P-gp的阳性表达率显著升高，而P-gp表达越高，其化疗有效率越低。表明P-gp在卵巢上皮癌的发生发展过程及原发性耐药机制中有一定作用。因此，P-gp可作为卵巢上皮癌预后的一个预测指标。　　GST-π是谷胱甘肽S转移酶的一个亚类。肿瘤细胞解毒能力的增强，使化疗药物在细胞内失活是导致肿瘤细胞耐药的另一重要机制。有学者研究认为，在耐药发生的早期阶段，GST-π非特异性的结合作用可协助药物通过P-gp形成的药物排流泵而外流，从而使之代谢解毒，GST-π与P-gp共同介导了早期耐药的产生。有学者研究认为卵巢癌组织中GST-π表达与其铂类耐药及预后有关，GST-π过度表达不仅与卵巢癌原发性耐药有关，而且可能与获得性耐药有关[1]。本研究结果表明，从卵巢良性肿瘤到交界性肿瘤再到癌变的过程中，GST-π阳性表达率逐渐增加，肿瘤分化程度越低以及临床分期越晚其表达越强，这提示可能与GST-π在肿瘤恶性化转变过程中被诱导激活而获得较多的表达量有关。本研究亦提示GST-π的表达阳性组化疗有效率低于表达阴性组，表明GST-π的表达可能参与卵巢癌耐药机制的调节，可作为预测化疗耐药和判断近期疗效的一个有效指标。8 　　LRP位于16号染色体短臂，编码分子质量110kU的LRP，LRP可能参与了胞膜胞质物质运输通道和胞质内囊泡的形成，以胞吐方式排出到胞外，降低了细胞内药物浓度使细胞产生耐药。故LRP一般介导对顺铂、卡铂、烷化剂等以DNA为靶点药物的耐药性。文献报道发现顺铂诱导耐药后可上调卵巢癌细胞中LRP的表达，故LRP可能与卵巢癌顺铂耐药有重要关系而决定卵巢癌患者的预后[2]。本研究结果表明LRP的表达随着卵巢上皮癌临床分期、病理分级的升高而增加，LRP表达阳性组化疗有效率明显低于阴性组。提示LRP在卵巢癌原发性耐药发生过程可能发挥着重要作用，并与预后密切相关。　　综上所述，卵巢上皮癌组织中存在原发的多个耐药基因的共同表达现象，如果P-gp、GST-π和LRP在卵巢癌组织中同时出现阳性时，化疗疗效差于三者表达阴性或仅一或两个表达阳性者。尽管三者在卵巢癌中存在程度不等的阳性表达率，但由于特异性差，尚不能分别成为评判化疗的单独指标。只有通过在卵巢癌组织中进行多基因的联合检测，才能更客观全面的筛选对不同耐药机制的高效低毒药物，这有助于指导个体化化疗方案的确定，同时对前瞻性优化化疗药物、预测化疗药物敏感性和判断化疗疗效具有重要的临床应用价值[3]。【参考文献】1]8 张树荣.卵巢癌耐药机制研究进展[J].实用妇产科杂志，2006，22(3)：148-150.　　[2]赵淑萍.卵巢癌化疗耐药基因检测的研究进展[J].国外医学，2006，33(1)：57-60.　　[3]卢丹，王志学，陶晓珏.卵巢癌组织中多药耐药基因蛋白表达及其临床价值[J].肿瘤防治杂志，2004，11(5)：512-514.8