notch在肝细胞癌中的表达及意义

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1、Notch在肝细胞癌中的表达及意义：任雪霞，徐正府，黄介飞，鄂群【摘要】目的：探讨Notch1~4在肝细胞癌中的表达特点及其肿瘤生物学意义。方法：采用免疫组织化学染色方法检测36例肝细胞癌及其癌旁组织中的Notch1~4的表达。结果：Notch1~4在肝细胞癌中的表达分别为16例（44.44%）、11例（30.56%）、15例（41.67%）、19例（52.78%），在癌旁组织中的表达分别为24例（66.67%）、17例（47.22%）、22例（61.11%）、27例（75.00%）。Notch1、Notch2和Notch4在肝细胞癌

2、中下调(P＜0.05)。结论：不同的Notch在肝细胞癌中的生物学行为不尽相同，Notch1、Notch2和Notch4表达下调，可能具有抑制肿瘤生长的作用。【关键词】肝细胞癌；Notch；免疫组织化学法；癌旁组织[Abstract]Objective:TostudytheexpressionofNotch1~4inhepatocellularcarcinoma（HCC）andanalyzeit’soncologicalsignificance.Methods:ImmunohistochemicalstainingeasureNotc

3、h1~4inthecarcinomatoustissuesandpericarcinomatoustissuesin36casesofHCC.Results:TheexpressionsofNotch1~4incarcinomatoustissuesatoustissuestheyayindicatethattheycansuppressthedevelopmentandprogressionofHCC.[Keya；Notch；Immunohistochemistorymethod；PericarcinomatoustissueNot

4、ch是进化过程中高度保守的局部细胞信号结构，参与多种细胞活动，决定细胞命运，在细胞分化、增殖、调亡等方面发挥重要作用[1]。Notch基因最初于1919年在果蝇体内被发现，Notch突变可影响果蝇的翅膀、眼及刚毛的形成，甚至在胚胎期造成致死性的神经发育障碍。Notch基因编码的跨膜受体是一个300kD（p300）的单链跨膜蛋白，在细胞膜形成一个由180kD（p180）和120kD（p120）多肽段构成的异二聚体。p180包含大部分的胞外区，p120则包含跨膜区和胞内区，其胞外区和胞内区均高度保守。当配体结合到胞外区，Notch蛋白发生

5、2次断裂。释放Notch胞内区（I）进入细胞核发挥生物学作用[2]。目前在脊椎动物中共发现了4种Notch同源体，包括Notch1、Notch2、Notch3和Notch4。近年来Notch信号途径成为发育生物学、神经学、血液学及肿瘤学等许多领域的研究热点之一。本研究采用免疫组织化学S-P法联合检测Notch1~4在肝细胞癌及对应的癌旁组织中的表达，旨在探讨不同Notch在肝细胞癌中的表达和作用。1材料与方法1.1材料（1）实验对象：2006年6月~2008年1月南通大学附属医院和南通市肿瘤医院手术切除的肝癌和对应的癌旁组织标本36例

6、，－80℃保存备用。4%多聚甲醛固定后，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片。术后肿瘤组织均病理证实为肝细胞癌；（2）主要试剂：山羊抗人Notch1多克隆抗体和兔抗人Notch3多克隆抗体为SantaCruzBiotechnology公司产品；山羊抗人Notch2多克隆抗体和鼠抗人Notch4单克隆抗体为RDSystems公司产品；免疫组化检测试剂盒购自上海晶美生物技术公司；多聚-L-赖氨酸购自福州迈新生物技术开发公司；DAB试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。1.2方法（1）载玻片处理：玻片经洗涤剂浸泡，自来水清洗后泡酸过夜，再自来水中漂

7、洗，蒸馏水冲洗，烤箱干燥后用稀释的多聚-L-赖氨酸溶液包被，于室温下晾干备用；（2）染色步骤：石蜡切片常规脱蜡至水，PBS冲洗。抗原修复：在10mM柠檬酸钠缓冲液（pH6.0）中加热沸腾切片1min，随后沸点以下温水中浸9min后PBS冲洗。1%过氧化氢孵育10min，消除内源性过氧化物酶后PBS冲洗。封闭液室温下封闭1h吸去封闭液。分别加山羊抗人Notch1多克隆抗体（1∶50）、兔抗人Notch3多克隆抗体（1∶50）、山羊抗人Notch2多克隆抗体（10μg/ml）和鼠抗人Notch4单克隆抗体（10μg/ml），4℃冰箱过夜。

8、加生物素标记的二抗至每张切片，室温下孵育30min后PBS冲洗。DAB显色后苏木素复染。梯度乙醇脱水、二甲苯透明后封盖玻片。用已知阳性片作为阳性对照，用PBS替代第一抗体作为阴性对照；（3）结果判断：参照邢传平等[3]的