姜黄素对肿瘤坏死因子诱导单核细胞趋化蛋白表达的影响_论文

《姜黄素对肿瘤坏死因子诱导单核细胞趋化蛋白表达的影响_论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、姜黄素对肿瘤坏死因子诱导单核细胞趋化蛋白1表达的影响【摘要】目的:观察姜黄素对肿瘤坏死因子α（TNFα）引起的血管内皮细胞分泌单核细胞趋化因子1(MCP1)的影响.方法：采用原代培养方法获得人脐静脉内皮细胞（HUVEC），随机分为对照组、TNFα刺激组和TNFα＋姜黄素组.先用TNFα刺激血管内皮细胞h，再加入不同浓度的姜黄素(,,25,50和100mg/L)共同孵育1h与单纯TNFα刺激作对照，采用MTT法、ELISA法和RTPCR法检测姜黄素对细胞及其上清液中MCP1蛋白表达的影响.结果:HUVEC经TNFα刺激h后，其MCP1表达为±，与对照组±相比明显增强（P

2、【关键词】姜黄素；单核细胞趋化因子；脐静脉；内皮细胞；肿瘤坏死因子【Abstract】AIM:Toobservetheinfluenceofcurcuminontumornecorsisfactor(TNFα)inducedexpressionofmonocytechemotacticprotein1(MCP1)inhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVEC).METHODS:Humanumbilicalveinendothelialcells(HUVEC)wereculturedanddividedintonormalgroup,TNFαsti

3、mulationgroupandTNFαandcurcuminassociatedstimulationgroup.9/9HUVECwerestimulatedwithTNFαforh,thenexposedtocurcuminfor1h(TNFαandcurcuminassociatedstimulationgroup),whichwasthencomparedwithTNFαstimulationgroupintheexpressionsofMCPinteractionbetweencurcuminandHUVECwasestimatedbyMTTmethod,ELISAandR

4、TPCR.RESULTS:TheexpressionofMCP1wasincreasedinHUVECstimulatedbyTNFαforh(±,P【Keywords】curcumin;monocytechemotacticprotein1;umbilicalveins;endothelialcell;tumornecrosisfactor　　0引言研究表明，单核细胞的趋化主要由单核细胞趋化蛋白1（MCP1）来实现,多种物质及细胞因子都可以诱导MCP1的表达［1］.肿瘤坏死因子α通过诱导内皮细胞而产生MCP1,吸引单核细胞迁入动脉内膜而参与动脉粥样硬化的发生和发展.中药姜黄

5、的有效成分姜黄素具有抗炎、抗动脉粥样硬化的作用，但目前的研究主要围绕其对脂质过氧化的抑制及对细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1和P选择素等炎性因子的表达的抑制作用等方面［2-3］,而对血管内皮细胞中MCP1表达影响的研究尚少见报道.9/9本实验通过在离体状态下以肿瘤坏死因子α为诱导因子，观察姜黄素对MCP1的影响，旨在进一步阐明其保护内皮细胞，抗动脉粥样硬化的作用机制.　　1材料和方法材料新生儿脐带由第四军医大学唐都医院妇产科提供；倒置显微镜（日本Olympas公司）；M199培养基、胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶（美国Gibco公司）；胎牛血清（杭州四季青生物公司）；姜黄素，TNFα（

6、美国Sigma公司）；噻唑蓝（北京华美公司）；兔抗人MCP1mAb，ELISA试剂盒（北京中山试剂公司）；Ⅷ因子多克隆抗体（武汉博士德公司）；RTPCR试剂盒（大连宝生物有限公司）；PCR所用引物由上海生工公司合成.方法人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的培养及鉴定无菌条件下，取正常妊娠足月分娩的新生儿脐带约30cm，用PBS反复冲洗脐静脉至无血水流出，止血钳夹住脐带一端，注入g/LⅠ型胶原酶10mL后夹住另一端，在50mL/LCO2孵育箱中消化30min后收集消化液，1000r/min离心8min后收集细胞，加入含80g/L胎牛血清的M199培养液，接种于25mL培养瓶中，在37℃，50mL

7、/LCO2孵育箱中待细胞生长至融合状态用g/L胰蛋白酶和g/L9/9乙二胺四乙酸混合液消化传代，实验采用第3代细胞，采用SP免疫组织化学染色法［3］检测人第Ⅷ因子相关抗原.噻唑蓝（MTT）法观察姜黄素对内皮细胞的作用将对数生长期的细胞按密度为×104/L接种于96孔板中，每孔加100μL细胞悬液，当细胞贴壁后进行药物干预并在37℃，50mL/LCO2孵箱中继续培养.实验分为对照组：M199培养液；