cik与dc细胞联合治疗例晚期恶性实体瘤_论文

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1、CIK与DC细胞联合治疗145例晚期恶性实体瘤【摘要】目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）和树突状细胞（DC）联合治疗晚期肿瘤。方法从外周血分离单个核细胞，体外经GMCSF和白细胞介素4(IL4)诱导产生DC细胞，淋巴细胞经干扰素γ（IFNγ）、IL2、CD3单抗和IL1α体外诱导产生CIK细胞，采用流式细胞术检测CIK的表型，并回输患者进行治疗，至少接受3次治疗。结果82例可评价病灶的患者中，3例完全缓解（CR），7例部分缓解（PR）；31例不可评价病灶的患者中，7例患者胸腹水消失，与治疗前相比，治疗后患者CD3+和CD8+明显升高（P【关键词】杀伤细胞树突

2、细胞细胞培养的免疫疗法肿瘤细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokineinducedkiller,CIK）是以CD3+CD56+T细胞为主要效应细胞的异质细胞群，具有增殖快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点。树突状细胞（dendritic9/9cell，DC）是体内功能最强大的专职抗原递呈细胞，是唯一能激活幼稚T细胞的抗原递呈细胞。DC与CIK共培养可促进CIK的增殖，并加强其功能[12]。为此，本单位自2017年10月～2017年10月将CIK细胞与DC细胞共培养用于145例晚期恶性实体肿瘤患者的治疗，取得较好的近期疗效，现将临床观察结果报告如下。1对象和方法对象145例恶性实体

3、瘤患者均经病理证实，男性99例，女性46例，中位年龄52岁（21～83岁）；其中胃癌25例，结直肠癌15例，肝癌、肺癌各20例，鼻咽癌12例，食管癌10例，非何杰金淋巴瘤、乳腺癌、恶性黑色素瘤及肾癌各5例，脑瘤4例，精原细胞瘤及前列腺癌各3例，胸腺瘤、胰腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、骨肉瘤及卵巢癌各2例，宫颈癌1例。按TNM国际分期法：Ⅲ期88例，Ⅳ期57例；82例有可测量病灶，31例有不可测量病灶（包括胸水和腹水），32例为术后患者；Karnofsky评分≥60分，预计生存期>3个月；治疗前心、肝、肾功能及血常规大致正常；采血前1个月及治疗期间均未接受过放、化疗。主要试剂

4、Ficoll淋巴分离液（北京军事医学科学院）；鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD56（美国Coulter公司）；rhIL4（英国PeproTech公司）；肿瘤坏死因子(TNFα，上海赛达生物药业有限公司)；CD3McAb（武汉生物制品研究所）；干扰素(IFNγ，上海克隆公司)；rhIL2（北京瑞德合通药业有限公司）；GMCSF（北京联合药业有限公司）；RPMI1640、无血清培养基AIMV（美国Gibco公司）。9/9肿瘤抗原来源于患者自身手术标本或肿瘤细胞系经超声波粉碎后，10000r/min离心×20min，收集上清为肿瘤组织/细胞裂解物。方法细胞的制备参照

5、文献[3]。新鲜分离的患者抗凝外周全血100mL，经Ficoll淋巴分离液梯度离心（500r/min×15min），取界面层单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells，PBMNC），用RPMI1640培养液悬浮细胞，离心（600r/min×10min），洗涤细胞3次后，细胞数约为106，用AIMV无血清培养基调整细胞密度为（4～6）×106mL-1，置于37℃、体积分数为的CO2中培养2h。收集非贴壁细胞，用含人AB血清的完全培养基调整细胞密度约为1×106mL-1，加入IFNγ1000U/mL，24h后加入rhIL2300U/mL，C

6、D3McAb70ng/mL，IL110U/mL，每3d换液1次，同时补加rhIL2100U/mL。细胞的培养参照文献[4]。在获得的贴壁的PBMNC细胞中加入含GMCSF1000U／mL、rhIL41000U／mL的AIMV培养基，在37℃、体积分数为的CO2中培养，每3d换液1次。第3d将肿瘤抗原加入DC培养液内，第5d加入TNFα1000U／mL，第7d将部分负载后的DC按1∶5的比例加入CIK培养液中，共培养5～7d。细胞增殖动态观察细胞增殖，采用标准白细胞计数方法，计算每毫升中的细胞总数。9/9细胞表型测定收集培养第1d和第12d的CIK细胞，PBS洗涤

7、细胞2次，使用不同的抗体组合标记细胞，这些抗体组合为：CD3CY5，CD8PE和CD3FITC，CD56PE，室温孵育20min后，PBS洗涤细胞2次，流式细胞仪分析。细胞回输收集培养12～14d的CIK细胞，细胞总数>1012个，600r/min×10min离心、洗涤2次后，细胞溶于生理盐水100mL中，细胞量>1010mL-1，静脉滴注，3h内回输患者体内。收集培养7～14d的悬浮的、经过表型鉴定的成熟DC，溶于1mL生理盐水中，106mL-1皮下注射。疗效评价疗效指标包括客观缓解率（OR）、有效率（R