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时间:2018-08-08
《cik与dc细胞联合治疗例晚期恶性实体瘤_论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、CIK与DC细胞联合治疗145例晚期恶性实体瘤【摘要】目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和树突状细胞(DC)联合治疗晚期肿瘤。方法从外周血分离单个核细胞,体外经GMCSF和白细胞介素4(IL4)诱导产生DC细胞,淋巴细胞经干扰素γ(IFNγ)、IL2、CD3单抗和IL1α体外诱导产生CIK细胞,采用流式细胞术检测CIK的表型,并回输患者进行治疗,至少接受3次治疗。结果82例可评价病灶的患者中,3例完全缓解(CR),7例部分缓解(PR);31例不可评价病灶的患者中,7例患者胸腹水消失,与治疗前相比,治疗后患者CD3+和CD8+明显升高(P【关键词】杀伤细胞树突
2、细胞细胞培养的免疫疗法肿瘤细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkiller,CIK)是以CD3+CD56+T细胞为主要效应细胞的异质细胞群,具有增殖快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点。树突状细胞(dendritic9/9cell,DC)是体内功能最强大的专职抗原递呈细胞,是唯一能激活幼稚T细胞的抗原递呈细胞。DC与CIK共培养可促进CIK的增殖,并加强其功能[12]。为此,本单位自2017年10月~2017年10月将CIK细胞与DC细胞共培养用于145例晚期恶性实体肿瘤患者的治疗,取得较好的近期疗效,现将临床观察结果报告如下。1对象和方法对象145例恶性实体
3、瘤患者均经病理证实,男性99例,女性46例,中位年龄52岁(21~83岁);其中胃癌25例,结直肠癌15例,肝癌、肺癌各20例,鼻咽癌12例,食管癌10例,非何杰金淋巴瘤、乳腺癌、恶性黑色素瘤及肾癌各5例,脑瘤4例,精原细胞瘤及前列腺癌各3例,胸腺瘤、胰腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、骨肉瘤及卵巢癌各2例,宫颈癌1例。按TNM国际分期法:Ⅲ期88例,Ⅳ期57例;82例有可测量病灶,31例有不可测量病灶(包括胸水和腹水),32例为术后患者;Karnofsky评分≥60分,预计生存期>3个月;治疗前心、肝、肾功能及血常规大致正常;采血前1个月及治疗期间均未接受过放、化疗。主要试剂
4、Ficoll淋巴分离液(北京军事医学科学院);鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD56(美国Coulter公司);rhIL4(英国PeproTech公司);肿瘤坏死因子(TNFα,上海赛达生物药业有限公司);CD3McAb(武汉生物制品研究所);干扰素(IFNγ,上海克隆公司);rhIL2(北京瑞德合通药业有限公司);GMCSF(北京联合药业有限公司);RPMI1640、无血清培养基AIMV(美国Gibco公司)。9/9肿瘤抗原来源于患者自身手术标本或肿瘤细胞系经超声波粉碎后,10000r/min离心×20min,收集上清为肿瘤组织/细胞裂解物。方法细胞的制备参照
5、文献[3]。新鲜分离的患者抗凝外周全血100mL,经Ficoll淋巴分离液梯度离心(500r/min×15min),取界面层单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMNC),用RPMI1640培养液悬浮细胞,离心(600r/min×10min),洗涤细胞3次后,细胞数约为106,用AIMV无血清培养基调整细胞密度为(4~6)×106mL-1,置于37℃、体积分数为的CO2中培养2h。收集非贴壁细胞,用含人AB血清的完全培养基调整细胞密度约为1×106mL-1,加入IFNγ1000U/mL,24h后加入rhIL2300U/mL,C
6、D3McAb70ng/mL,IL110U/mL,每3d换液1次,同时补加rhIL2100U/mL。细胞的培养参照文献[4]。在获得的贴壁的PBMNC细胞中加入含GMCSF1000U/mL、rhIL41000U/mL的AIMV培养基,在37℃、体积分数为的CO2中培养,每3d换液1次。第3d将肿瘤抗原加入DC培养液内,第5d加入TNFα1000U/mL,第7d将部分负载后的DC按1∶5的比例加入CIK培养液中,共培养5~7d。细胞增殖动态观察细胞增殖,采用标准白细胞计数方法,计算每毫升中的细胞总数。9/9细胞表型测定收集培养第1d和第12d的CIK细胞,PBS洗涤
7、细胞2次,使用不同的抗体组合标记细胞,这些抗体组合为:CD3CY5,CD8PE和CD3FITC,CD56PE,室温孵育20min后,PBS洗涤细胞2次,流式细胞仪分析。细胞回输收集培养12~14d的CIK细胞,细胞总数>1012个,600r/min×10min离心、洗涤2次后,细胞溶于生理盐水100mL中,细胞量>1010mL-1,静脉滴注,3h内回输患者体内。收集培养7~14d的悬浮的、经过表型鉴定的成熟DC,溶于1mL生理盐水中,106mL-1皮下注射。疗效评价疗效指标包括客观缓解率(OR)、有效率(R
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