cik与dc细胞联合治疗145例晚期恶性实体瘤

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1、CIK与DC细胞联合治疗145例晚期恶性实体瘤【摘要】目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）和树突状细胞（DC）联合治疗晚期肿瘤。方法从外周血分离单个核细胞，体外经GMCSF和白细胞介素4(IL4)诱导产生DC细胞，淋巴细胞经干扰素γ（IFNγ）、IL2、CD3单抗和IL1α体外诱导产生CIK细胞，采用流式细胞术检测CIK的表型，并回输患者进行治疗，至少接受3次治疗。结果82例可评价病灶的患者中，3例完全缓解（CR），7例部分缓解（PR）；31例不可评价病灶的患者中，7例患者胸腹水消失，与治疗前相比，治疗后患者CD3+和CD8+明显升高（P<0.05）。结论CIK细胞治疗晚期

2、恶性实体瘤有一定的临床疗效，为该类患者的治疗提供一种有效的免疫治疗手段。【关键词】杀伤细胞树突细胞细胞培养的免疫疗法肿瘤细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokineinducedkiller,CIK）是以CD3+CD56+T细胞为主要效应细胞的异质细胞群，具有增殖快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点。树突状细胞（dendriticcell，DC）是体内功能最强大的专职抗原递呈细胞，是唯一能激活幼稚T细胞的抗原递呈细胞。DC与CIK共培养可促进CIK的增殖，并加强其功能[12]。为此，本单位自2003年10月～2005年10月将CIK细胞与DC细胞共培养用于145例晚期恶性实体肿瘤患者的治疗，取得较好的

3、近期疗效，现将临床观察结果报告如下。1对象和方法1.1对象145例恶性实体瘤患者均经病理证实，男性99例，女性46例，中位年龄52岁（21～83岁）；其中胃癌25例，结直肠癌15例，肝癌、肺癌各20例，鼻咽癌12例，食管癌10例，非何杰金淋巴瘤、乳腺癌、恶性黑色素瘤及肾癌各5例，脑瘤4例，精原细胞瘤及前列腺癌各3例，胸腺瘤、胰腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、骨肉瘤及卵巢癌各2例，宫颈癌1例。按TNM国际分期法：Ⅲ期88例，Ⅳ期57例；82例有可测量病灶，31例有不可测量病灶（包括胸水和腹水），32例为术后患者；Karnofsky评分≥60分，预计生存期>3个月；治疗前心、肝、肾功能及血常规

4、大致正常；采血前1个月及治疗期间均未接受过放、化疗。1.2主要试剂Ficoll淋巴分离液（北京军事医学科学院）；鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD56（美国Coulter公司）；rhIL4（英国PeproTech公司）；肿瘤坏死因子(TNFα，上海赛达生物药业有限公司)；CD3McAb（武汉生物制品研究所）；干扰素(IFNγ，上海克隆公司)；rhIL2（北京瑞德合通药业有限公司）；GMCSF（北京联合药业有限公司）；RPMI1640、无血清培养基AIMV（美国Gibco公司）。1.3肿瘤抗原于患者自身手术标本或肿瘤细胞系经超声波粉碎后，10000r/min离心×20min，收集上清

5、为肿瘤组织/细胞裂解物。1.4方法1.4.1CIK细胞的制备参照文献[3]。新鲜分离的患者抗凝外周全血100mL，经Ficoll淋巴分离液梯度离心（500r/min×15min），取界面层单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells，PBMNC），用RPMI1640培养液悬浮细胞，离心（600r/min×10min），洗涤细胞3次后，细胞数约为106，用AIMV无血清培养基调整细胞密度为（4～6）×106mL-1，置于37℃、体积分数为0.05的CO2中培养2h。收集非贴壁细胞，用含人AB血清的完全培养基调整细胞密度约为1×106mL-1，加入IFNγ1000

6、U/mL，24h后加入rhIL2300U/mL，CD3McAb70ng/mL，IL110U/mL，每3d换液1次，同时补加rhIL2100U/mL。1.4.2DC细胞的培养参照文献[4]。在1.2.3获得的贴壁的PBMNC细胞中加入含GMCSF1000U／mL、rhIL41000U／mL的AIMV培养基，在37℃、体积分数为0.05的CO2中培养，每3d换液1次。第3d将肿瘤抗原加入DC培养液内，第5d加入TNFα1000U／mL，第7d将部分负载后的DC按1∶5的比例加入CIK培养液中，共培养5～7d。1.4.3细胞增殖动态观察细胞增殖，采用标准白细胞计数方法，计算每毫升中的细

7、胞总数。1.4.4细胞表型测定收集培养第1d和第12d的CIK细胞，PBS洗涤细胞2次，使用不同的抗体组合标记细胞，这些抗体组合为：CD3CY5，CD8PE和CD3FITC，CD56PE，室温孵育20min后，PBS洗涤细胞2次，流式细胞仪分析。1.4.5细胞回输收集培养12～14d的CIK细胞，细胞总数>1012个，600r/min×10min离心、洗涤2次后，细胞溶于生理盐水10