cik与dc细胞联合治疗145例晚期恶性实体瘤论文

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1、CIK与DC细胞联合治疗145例晚期恶性实体瘤论文【摘要】目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）和树突状细胞（DC）联合治疗晚期肿瘤。方法从外周血分离单个核细胞，体外经GMCSF和白细胞介素4(IL4)诱导产生DC细胞，淋巴细胞经干扰素γ（IFNγ）、IL2、CD3单抗和IL1α体外诱导产生CIK细胞，采用流式细胞术检测CIK的表型，并回输患者进行治疗，至少接受3次治疗。结果82例可评价病灶的患者中，3例完全缓解（CR），7例部分缓解（PR）；31例不可评价病灶的患者中.freelin离心×20min，收集上清为肿瘤组织/细胞裂解物。1.4方法1.4.1CIK细胞的制

2、备参照文献3。新鲜分离的患者抗凝外周全血100mL，经Ficoll淋巴分离液梯度离心（500r/min×15min），取界面层单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells，PBMNC），用RPMI1640培养液悬浮细胞，离心（600r/min×10min），洗涤细胞3次后，细胞数约为106，用AIMV无血清培养基调整细胞密度为（4～6）×106mL-1，置于37℃、体积分数为0.05的CO2中培养2h。收集非贴壁细胞，用含人AB血清的完全培养基调整细胞密度约为1×106mL-1，加入IFNγ1000U/mL，24h后加入rhIL2300U/mL

3、，CD3McAb70ng/mL，IL110U/mL，每3d换液1次，同时补加rhIL2100U/mL。1.4.2DC细胞的培养参照文献4。在1.2.3获得的贴壁的PBMNC细胞中加入含GMCSF1000U／mL、rhIL41000U／mL的AIMV培养基，在37℃、体积分数为0.05的CO2中培养，每3d换液1次。第3d将肿瘤抗原加入DC培养液内，第5d加入TNFα1000U／mL，第7d将部分负载后的DC按1∶5的比例加入CIK培养液中，共培养5～7d。1.4.3细胞增殖动态观察细胞增殖，采用标准白细胞计数方法，计算每毫升中的细胞总数。1.4.4细胞表型测定收集培养

4、第1d和第12d的CIK细胞，PBS洗涤细胞2次，使用不同的抗体组合标记细胞，这些抗体组合为：CD3CY5，CD8PE和CD3FITC，CD56PE，室温孵育20min后，PBS洗涤细胞2次，流式细胞仪分析。1.4.5细胞回输收集培养12～14d的CIK细胞，细胞总数1012个，600r/min×10min离心、洗涤2次后，细胞溶于生理盐水100mL中，细胞量1010mL-1，静脉滴注，3h内回输患者体内。收集培养7～14d的悬浮的、经过表型鉴定的成熟DC，溶于1mL生理盐水中，106mL-1皮下注射。1.5疗效评价疗效指标包括客观缓解率（OR）、有效率（RR）和临床受益

5、率（CBR）。1.5.1可测量病灶的客观缓解率（OR）主要采用CT或胸片、B超测量病灶大小(双径测量)，按HC)等能激活T细胞的分子，不能被T细胞识别，而无法激活T细胞介导的主动免疫。而今，恶性肿瘤的过继性免疫治疗已经成为肿瘤治疗的重要辅助手段。在临床上，淋巴因子激活的杀伤细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞等细胞治疗已经成功用于某些肿瘤的冶疗，取得一定的疗效，但其缺点也很明显；体外增殖数量少、细胞杀瘤活性低、不良反应大等，限制了其进一步推广应用。CIK细胞是以CD3+CD56+细胞为主的异质细胞群，是一种非MHC限制性的高效溶肿瘤细胞毒性T淋巴细胞，目前临床所用CIK细胞主要是以CD3+/

6、CD8+和CD3+/CD56+为主的异质性细胞6。童春容等已经将CIK细胞用于临床白血病的治疗，并取得较好的疗效7。DC细胞是体内功能最强的专职抗原递呈细胞，它的独特之处在于它能激活幼稚T细胞，并且它抗原递呈能力比B细胞和巨噬细胞强100倍，在机体免疫系统中发挥着十分重要的作用。有研究表明，将负载抗原的DC细胞与CIK细胞共培养后，可促进DC与CIK细胞成熟5,并可促进CIK的增殖和功能，其机制可能为：（1）成熟的DC表面的大量树枝状突起可使其负载肿瘤抗原并呈递给CIK细胞；（2）激活后的DC分泌IL12、IL18及IFNγ等细胞因子，刺激Th0、Th2细胞向Th1细胞分化

7、，并强烈激发Th1型特异性免疫应答；通过MHCⅡ类分子途径将外源性的肿瘤抗原呈递给CD8细胞，同时还提供充分的共刺激信号。笔者认为，DC有可能在特异性和非特异性免疫之间起到桥梁作用，而DCCIK治疗可作为肿瘤过继免疫治疗的首选方案。本研究通过流式细胞仪检测发现，随着诱导培养时间的递增，CIK细胞CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞的比例增高，与培养前相比差别具有统计学意义（P0.01），这说明诱导活化后的细胞既具有T细胞标志（CD3），也有NK细胞表面标志（CD56）