地中海贫血基因诊断ppt

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1、地中海贫血基因诊断LOGO地中海贫血地中海贫血介绍1发病机制2基因诊断和治疗31925年,Cooley描述了一个幼儿患有贫血,并伴发有有核红细胞增多症.此后,意大利,希腊等地中海区域也陆续发现并报道类似疾病,因该病首先在地中海区域发现,因此被称为地中海贫血.(thalassemia).“地中海贫血症”来源地中海贫血症介绍地中海贫血(THAC)是一种较为常见的单基因遗传性疾病，多出现在我国的南方各省，又以海南及两广沿海地区多发。其主要致病机制为α珠蛋白或β珠蛋白基因出现缺失或具有缺陷，从而引起血红蛋白中不同肽链出现合成比例失衡，进

2、而导致了溶血性贫血疾病的发生。珠蛋白基因的结构及表达1.珠蛋白基因的结构α珠蛋白基因簇16p13β珠蛋白基因簇11p15地中海贫血的分型·α地中海贫血：根据造成人贫血病情的严重性将其分为4种类型。·β地中海贫血：根据造成病情的严重性分为3种类型：·重型地中海贫血·中间型地中海贫血·轻型地中海贫血α地中海贫血(α地贫)的类型名称基因型缺失基因a链的合成Bart’s水肿胎儿综合征a0/a0――/――0HbH病a＋/a0α―/――25％标准型aA/a0αα/――50％a＋/a＋α―/α―静止型aA/a＋αα/α―75％正常aA/aAα

3、α/αα100％缺失一个α基因——尚有部分α链合成者，α+地贫；缺失两个α基因——α链完全不能合成者，α0地贫。4个α基因缺失→→α珠蛋白缺失→→γ4/高氧亲和力→→组织严重缺氧A.HbBart’s胎儿水肿综合症3个α缺失→β4B.血红蛋白H病（α0/α+）高氧亲和力→组织缺氧H包涵体→溶血→贫血C.标准型α地中海贫血（α0/αA或α+/α+）D.静止型α地中海贫血（α+/αA）重型地贫：(0／0、+／+、0／0)轻型地贫：(0／A、0／A、0／A)中间型地贫：(+(高F)／+(高F)、

4、+／+)遗传性胎儿血红蛋白持续增多症(HbFα2γ2)地贫临床类型β珠蛋白生成障碍性贫血A.重型β地中海贫血患者不能合成β链α链过剩而沉降到红细胞膜上，引起膜的性能改变，发生严重的溶血反应，引起肝脾增大。组织缺氧，促进红细胞生成素分泌，刺激骨髓增生，骨质受损变得疏松，可出现鼻塌眼肿、上颔前突、头大额隆等特殊的“地中海贫血面容”。B.中间型β地中海贫血一般是β+地中海贫血基因的纯合子，患者的基因型通常为β+（高F）／β+（高F）或β+／δβ+。病人的症状介于重型和轻型之间，故称为中间型。C.轻型β地中海贫血发生于β0或β+

5、地中海贫血基因的杂合子，无任何临床症状。D.遗传性胎儿血红蛋白持续增多症HbFα2γ2遗传缺陷导致δ和β基因表达受到抑制，而γ链合成却异常增高，使成人红细胞内的胎儿血红蛋白HbF持续增多。地中海贫血的分子机制α地中海贫血的分子机制地中海贫血的分子机制基因缺失：缺失型α地中海贫血基因突变：非缺失型α地中海贫血基因缺失基因突变编码序列突变；转录调控序列突变（TATAbox)；RNA加工和修饰信号序列突变（GT-AG接头）地中海贫血基因诊断α地中海贫血的基因诊断步骤PCR扩增基因型分析α地中海贫血的基因诊断结果PCR扩增缺失型突变检

6、测PCR反应条件为:95℃预变性5min，98℃45s，66℃30s，72℃3min，35个循环，最后72℃延伸5min。非缺失型突变检测PCR反应条件为:94℃预变性5min，94℃60s，55℃30s，72℃60s，35个循环，最后72℃延伸5min。基因型分析将上述PCR扩增产物与膜条100℃变性10min，43℃杂交2h以上，洗膜，加入酶标抗生物素蛋白，再次洗膜，加入酶底物显色，具体步骤按说明书进行操作。杂交及显色完成后，观察膜条上的蓝色斑点，若只有野生型探针处(N)显色，为该位点的野生纯合子;若只有突变型探针处(M)显

7、色，为该位点的突变纯合子;若野生型探针处(N)和突变型探针处(M)均显色，为该位点的杂合子。α地中海贫血的基因诊断结果样本基因型缺失型和非缺失型α－地贫基因突变检测结果见图1和图2。图1缺失型α－地贫基因突变检测结果图2非缺失型α－地贫基因突变检测结果β地中海贫血的基因诊断步骤PCR扩增反向点杂交(reversedot-blot,RDB)杂交结果判定α地中海贫血的基因诊断结果PCR扩增抽取受检者EDTA抗凝血2ml，按试剂盒操作说明书提取患者DNA,在A、B两管PCR反应液中分别加入提取的DNA2ul。PCR反应条件为:93℃预

8、变性5min;93℃变性30s,复性60℃30s,72℃延伸1min,35个循环;最后72℃延伸5min。反向点杂交(reversedot-blot,RDB)将上述PCR扩增产物与膜条100变性10min,42℃杂交4h以上,洗膜,加入酶标抗生物素蛋白,再次洗膜