地中海贫血基因诊断项目开展指南.doc

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1、α-地中海贫血基因诊断项目开展指南一　α-地中海贫血基因诊断流程示意图二　实验室建设1最佳α-地中海贫血基因诊断实验室设计平面图1）实验室应具有试剂准备区、标本制备区、PCR扩增区及产物分析区（如上图）2）临床样本的收取及储存应该在这4个区域以外的地方完成。3）进入各个工作区必须遵循严格的单一方向顺序。4）进入各工作区必须严格按照要求更换各区域特定颜色的工作服，并同时佩戴一次性手套。出工作区之前必须脱去区域特定工作服及手套。5）每一个工作区都应有独立的一套仪器设备及耗材（包括移液器、离心机、试管架、一次性手套、移液吸头、离心

2、管及冰箱等），且不同区域的仪器设备及耗材不能混用。2实验室环境1）工作区域必须始终保持清洁整齐2）所有实验台面及地面均应保持清洁.3）所有实验废料及垃圾使用专用垃圾袋装好后，封口处理。4）每次工作前后对工作台面进行消毒液擦洗、消毒酒精擦洗工作，并在完成工作后开启紫外灯进行灭菌。3实验室制度及人员配备1）实验室必须有完整详细的操作规章制度并严格遵守。2）操作人员需要一定的专业技术知识和经验。3）操作人员需要有强烈的责任感，且工作认真细心。4）操作人员需要严格遵守α-地贫基因诊断的操作规程。三　实验所需试剂、设备及其功能简介α-

3、地中海贫血基因诊断实验主要由以下三个实验组成：全血或羊水DNA的抽提，基因扩增（PCR），电泳分析。1实验所需试剂名称目的提供试剂自备试剂全血或羊水DNA的抽提提取DNA全血DNA快速提取试剂盒无水乙醇基因扩增用于扩增DNA样本PCR反应液（-18℃以下保存），纯水，矿物油无电泳检测分析分析各PCR扩增产物无电泳缓冲液、核酸染料、琼脂糖、上样缓冲液等2实验所需仪器（推荐使用）及功能简介实验所需试剂所需仪器及部分耗材功能简介全血或羊水DNA的抽提使用全血或羊水DNA抽提试剂盒台式高速离心机转速要求13,000rpm将细胞与细胞

4、保存液分开超净工作台为实验操作提供一个洁净，安全的操作环境。真空旋转干燥仪干燥沉淀微量移液器0.5-10µL，10-100µL,100-1000µL（专用）微量加样和移液1.5mL离心管（已灭菌）及管架（专用）已灭菌移液吸头（与移液器配套）（专用）旋涡振荡器转速：2800rpm悬浮沉淀工作服及一次性手套（专用）保护操作人员同时防止实验污染冰盒维持PCR反应液的低温要求，避免PCR试剂因为温度的变化而对实验结果的影响。冰箱（-20℃，4℃）存放采集的样本及已抽提好的DNA样本记号笔，计时器等对不同样本进行编号及计时全血或羊水细

5、胞DNA扩增PCR反应液普通PCR仪样本DNA在短时间里指数性的增长。电泳检测电泳试剂电泳系统（电泳仪和电泳槽）电泳分离不同大小的DNA片段微波炉快速加热液体微量移液器一套（0.5-10,10-100µL,100-1000µL）（专用）微量加样和移液紫外透射分析仪（或凝胶成像系统）观察电泳凝胶中已分离的DNA片段电子天平/托盘天平准确称量微量物质移液吸头（与移液器配套）（已灭菌,专用）和移液器配套使用，量取不同体积的液体试剂。冰箱4℃放置电泳试剂工作服及一次性手套保护操作人员同时防止实验污染记号笔及计时器等对不同样本进行编号

6、及计时胶床，胶带纸，Parafilm膜，锥形瓶，锡纸，药匙，厚手套，1.5mL离心管架，50mL量筒等β-地中海贫血基因诊断项目开展指南一　β－地中海贫血基因诊断实验工作流程二　实验室建设1最佳β-地中海贫血基因诊断实验室设计平面图1）实验室应具有试剂准备区、标本制备区、PCR扩增区及产物分析区（如上图）2）临床样本的收取及储存应该在这4个区域以外的地方完成。3）进入各个工作区必须遵循严格的单一方向顺序。4）进入各工作区必须严格按照要求更换各区域特定颜色的工作服，并同时佩戴一次性手套,出工作区之前必须脱去区域特定工作服及手套

7、。5）每一个工作区都应有独立的一套仪器设备及耗材（包括移液器、离心机、试管架、一次性手套、移液器吸头、离心管及冰箱等），且不同区域的仪器设备及耗材不能混用。2实验室环境1）工作区域必须始终保持清洁整齐2）所有实验台面及地面均应保持清洁.3）所有实验废料及垃圾使用专用垃圾袋装好后，封口处理。4）每次工作前后对工作台面进行消毒液擦洗、消毒酒精擦洗工作，并在完成工作后开启紫外灯灭菌。3实验室制度及人员配备1）实验室必须有完整详细的操作规章制度并严格遵守。2）操作人员需要一定的专业技术知识和经验。3）操作人员需要有强烈的责任感，且工

8、作认真细心。4）操作人员需要严格遵守β-地贫基因诊断的操作规程进行实验操作。三　实验所需试剂、设备及其功能简介β-地中海贫血基因诊断检测实验主要由以下三个实验组成：全血DNA的抽提，基因扩增（PCR），杂交分析。1实验所需试剂名称用途备注全血DNA快速提取试剂盒提取DNA全血DNA的抽提试