x-射线通过诱导tnf-α的产生促进dc疫苗的抗肿瘤作用-免疫学专业论文

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1、优秀毕业论文河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。，研究生签名：王卅卟导师签章：喙奔欢二级学院领导盖章：勃∥年Z月多日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作

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3、图．28讨{仑．35结论．36参考文献．37综述放疗促进以树突状细胞为基础的免疫治疗的研究进展40致谢．48个人简历．49精品参考文献资料优秀毕业论文万方数据精品参考文献资料优秀毕业论文中文摘要X．射线通过诱导TNF．a的产生促进DC疫苗的抗肿瘤作用摘要目的：肿瘤DC疫苗是肿瘤免疫治疗中很有前景的方法之一，但随着对肿瘤DC疫苗研究的不断深入，人们发现由于受到肿瘤微环境的影响，单纯使用肿瘤DC疫苗难以获得满意的结果。高能x一射线在杀死肿瘤细胞的同时，还可诱导肿瘤细胞产生HMGB．1及HSP70等内源性因子，增加

4、肿瘤细胞的免疫原性。因此，X一射线照射可促进肿瘤DC疫苗的抗瘤能力。但对X．射线与DC疫苗的联合的方式以及二者联合抗肿瘤的机制的研究还有待进行深入研究。本研究以荷瘤小鼠为模型，首先观察了X-射线照射后，肿瘤DC疫苗注射的时间窗对二者联合抗肿瘤的影响，同时对联合抗瘤的机制进行了较系统的分析。方法：1DC疫苗制备、活性及其抗原呈递能力检测处死BALB／c小鼠，取小鼠股骨的骨髓细胞，用含有GM．CSF(10ng／m1)和IL一4(10ng／mt)的完全培养基诱导树突状细胞分化，在培养的第5天，重新收集细胞计数，调节

5、细胞数至1×106／ml，重新加入24孔细胞培养板，加入x射线处理的4T1肿瘤细胞裂解液(终浓度50}tg／m1)，在37。C含饱和水气、5％的C02培养箱中孵育16小时，然后再用LPS(100ng／m1)和IFN—Y(10ng／m1)刺激36h进一步诱导DCs的成熟，以此作为DC疫苗。用终浓度251ag／ml的丝裂霉素C处理的DC细胞做为刺激细胞，反应细胞是雌性C57BL／6／J、鼠的脾细胞。将反应细胞和刺激细胞分别以200：l、100：1、50：1的比例加入蛰J96；f[．U型板中孵育96／J',时，孵育

6、完成之前的4h每孔加入20¨1CellTiter96⑩AQueousOneSolutionReagent。用MTS比色法来检测反应细胞增殖情况。收集抗原负载的、LPS和IFN．Y诱导成熟的DCs的培养上清，检、狈,JjIL．12p70的水平，以了解DC分泌IL．12的情况。同时收集抗原负载的、LPS和IFN．Y诱导成熟的DCs，流式细胞仪检精品参考文献资料优秀毕业论文万方数据精品参考文献资料优秀毕业论文中文摘要测CDllC、MHCII、CD86和ICAM．1的表达。2X一射线对荷瘤小鼠肿瘤组织及肿瘤浸润淋巴细

7、胞细胞因子表达的动态分析2．1x一射线处理荷瘤小鼠将4Tl细胞移植BALB／c小鼠右侧第五对乳腺脂肪垫下，在肿瘤细胞移植的第七天将荷瘤小鼠随机分为3组(8只／组)。未处理组、10Gyx3照射组(10Gy齐mj量照射，每日一次，连续3天)、30Gy照射组。2．2Real．timePCR动态分析肿瘤组织及肿瘤浸润淋巴细胞IL．6、IL一10mRNA的表达在X一射线照射肿瘤块后的第2、11并[121天，分别处死荷瘤小鼠，分离肿瘤组织，分别提取肿瘤组织和肿瘤浸润淋巴细胞的总RNA，经常规反转录后，用IL．6、IL．1

8、0特异性引物扩增。2．3ELISA分析TGF．B及TNF．0L的水平在x．射线照射肿瘤块后的第2、11和21天，分别处死荷瘤小鼠，分离肿瘤组织，PBS洗去血污，用含有蛋白酶抑制剂的500_ldPBS进行匀浆，12000r／rain，4。C离心15min，取上清，按照试剂盒说明书进行细胞因子测定。3观察x射线联合DC疫苗对荷瘤鼠肿瘤生长情况将4T1细胞经腹部右侧第五对乳腺脂肪垫移植给BALB／cdx鼠