大鼠动脉粥样硬化cox2 mrna表达及白黎芦醇干预的实验研究

《大鼠动脉粥样硬化cox2 mrna表达及白黎芦醇干预的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大鼠动脉粥样硬化COX2mRNA表达及白黎芦醇干预的实验研究作者：张丽张涛朴金花张鹏霞【摘要】目的观察白黎芦醇对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠主动脉粥样硬化段COX2mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠高脂饲料喂养，复制食饵性AS早期模型,用药组灌胃白藜芦醇。造模给药4w后,用RTPCR方法观察对照组、模型组和用药组主动脉壁粥样硬化段COX2mRNA的表达。结果用药组降低AS早期主动脉硬化段COX2表达,阻止AS的进程。结论白藜芦醇对大鼠AS具有保护作用,并能提高AS斑块稳定性。【关键词】白藜芦醇;动脉粥样硬化;环氧合酶2mRNA环氧合酶(cyclooxygenase,COX)

2、又名前列腺素内过氧化物合成酶P(GHSs)，是一种膜结合蛋白，是前列腺素生物合成的限速酶,该酶有2种亚型,即COX1和COX2。近年来许多研究表明诱导型酶COX2与心血管疾病关系密切〔1〕。白黎芦醇具有广泛的抗动脉粥样硬化（AS）、抗肿瘤及类雌激素性作用，并逐渐成为预防和治疗AS的热点〔2〕。但其对AS早期模型主动脉硬化斑块中COX2表达的影响未见报道。本研究旨在为治疗AS的药物开发方面开辟新的思路。6　　1材料与方法　　1.1药物与试剂白藜芦醇由本实验室从虎杖中提取(99%,HPLC),白藜芦醇标准品由Sigma公司提供。实验时用蒸馏水配成混悬液。Trizol和逆转录PCR试剂

3、盒分别为上海生工生物公司和大连TaKaRa公司产品。血清总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)测定试剂盒为上海科欣生物技术研究所产品。　　1.2模型制备及给药方法健康雄性SD大鼠30只,体重180～200g,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。普通饲料喂养1w后,随机分为对照、模型和用药组，每组10只。除对照组用普通饲料喂养外,其余各组均给予高脂饲料(由胆固醇4%、丙基硫氧嘧啶0.2%、猪油10%和基础饲料85.8%组成)喂养。高脂饲料喂养大鼠后,一次性腹腔注射VD37×105U/kg。4w末尾静脉取血分离血清检测血脂升高后造模成功。用药组白藜芦醇剂量(70

4、mg·kg-1·d-1)连续灌胃4w。每周称重2次,根据体重调整剂量。对照组和模型组均灌胃等容量生理盐水。　　1.3血样采集模型制备动物到期处死前禁食12h,眼球取血分离血清。试剂盒酶法测定血清脂类；分离主动脉硬化段，留待RTPCR检测COX2mRNA表达。　　1.4RTPCR检测COX2mRNA表达6用Trizol提取主动脉硬化段总RNA,然后用紫外分光光度计测定其纯度并定量，1%琼脂糖凝胶电泳验证RNA完整性。按照逆转录试剂盒说明进行逆转录合成cDNA;以GAPDH为内对照,进行半定量逆转录聚合酶链反应。序列为：COX2:上游5′AAACTGTACTACGCCGAGAT

5、3′，下游：5′TCCACCGATGACCTGATA3′，其扩增产物长度为580bp。内参照GAPDH5′TGCTGAGTATGTCGTGGAG3′(上游)，5′GTCTTCTGAGTGGCAGTGAT3′(下游)，其扩增产物长度288bp。各组反应条件为：94℃预变性3min后，94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸30s,共进行35次循环,最后再72℃延伸5min,4℃冷却终止反应。以GAPDH为内参照同时进行PCR。聚合酶链反应产物用溴化乙啶的1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。用GDS8000凝胶扫描分析系统分别对COX2进行吸光度扫描，计算出COX2基因表达量与

6、GAPDH基因表达量的比值。　　1.5统计学处理计量资料采用x±s表示，多组数据间比较采用F检验和q检验，两组间数据比较采用t检验。　　2结果　　2.1对COX2mRNA表达的影响RTPCR结果显示，模型组大鼠主动脉硬化段组织的COX2mRNA表达(1.29±0.36)较正常组(0.35±0.04)增加，用药组(0.95±0.27)较模型组明显降低，差异均具有统计学意义(均P＜0.01)。见图1。6　　M：Marker；1：对照组；2：模型组；3：用药组　　图1各组大鼠主动脉壁粥样硬化段COX2mRNA表达（略）　　2.2高脂饮食对大鼠血脂的影响高脂饮食喂饲,对照组与模型组大鼠血

7、清TC、TG、HDLC分别为(1.85±0.32)vs(14.83±3.91)、(0.63±0.19)vs(0.91±0.15)、(1.57±0.14)vs(0.58±0.07)mmol/L。模型组较对照组大鼠血清TC、TG显著升高，HDL显著降低，差异均具有统计学意义(均P＜0.05)。　　3讨论　　近年来许多研究表明COX2与动脉粥样硬化性心、脑血管疾病关系密切〔3〕。有学者把AS本身也看作是一种炎症反应过程，认为炎症释放的