大鼠腔隙梗塞模型的建立及白黎芦醇的神经保护作用

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1、中文摘要研究背景和目的:腔隙梗塞(L工)，即小而深的脑梗塞，是脑梗塞中常见的一种类型，其发病通常为高血压、糖尿病密切相关的脑细小穿通动脉的特殊病变所致。随着CT和MRI在临床工作中的广泛应用，对越来越多的腔梗病人均可作出诊断。但至今有关腔隙梗塞发病机制的实验室工作却微乎其微。Toshima首次报道了穿枝动脉内皮损伤导致腔隙梗塞的动物模型。他们利用SD大鼠通过颈内动脉注入月桂酸钠建立了腔隙梗塞模型。月桂酸钠可选择性损伤大脑穿枝动脉的内皮细胞，导致原位微血栓形成。我们的研究有两个目的:重复建立Toshima腔隙梗塞模型，用三种行为学试验(姿势反射试验，肢体不对称应用试验，角落

2、试验)来检测此模型。另一个目的是研究白黎芦醇对U模型的神经保护作用。白黎芦醇(RES)是一种植物抗毒素，广泛存在于多种植物中，具有多种生物学活性。例如抗炎，抗血小板聚集，抗氧化等。本实验利用Toshima模型，评价RES在LI模型上是否能有效地减少梗塞大小和改善神经功能缺损。实验方法:本研究分为两部分:第一部分是腔隙梗塞模型的建立。37只雄性SD大鼠，体重270-300g，随机分为四组:A组(LI模型组)、B组(假手术组)、C组(PTAH染色组)、D组(电镜分析组)。A.B两组参照Toshima模型制作方法，略有改进，分别于实验第一天、第三天10%水合氯醛麻醉(0.4ml

3、/100g),A组(n=15)大鼠右侧颈内动脉注射1001g月桂酸钠(溶于0.lml生理盐水中)。B组(n=10)大鼠右颈内动脉仅注射0.Iml生理盐水，而无月桂酸钠。三种行为学评价分别在实验的第三天(第二次注入月桂酸钠前)和第六天进行。第六天行为学评价后，处死动物，脑冠状切片Luxolfastblue-HE染色以行梗塞面积定量及组织学分析。行为学评价数据用SPSS软件包进行统计。C组(n=5)大鼠于第一次注射月桂酸钠后5小时处死、取脑，脑冠状切片PTAH染色观察注药侧大脑半球穿枝动脉内的纤维蛋白丝。D组7只大鼠于第一次注射月桂酸钠或盐水后lh和5h处死，取脑，选择注药侧

4、半球的皮质、海马、丘脑区域取材并切块。剥离每只大鼠的右大脑中动脉并切块。以上标本制成半薄片及超薄片，准备作电镜分析。第二部分:白黎芦醇(RES)对LI模型的干预研究。60只SD雄性大鼠(体重270-325g)随机分为4组:R1,R2,R3,CON，每组15只。RI-R3组为白黎芦醇干预组，浓度分别为10-6,10"',10-Ig/Kg(RES溶于40%丙二醇中，再用生理盐水稀释成需要的浓度)。CON组仅用溶剂注射，而不含RES。治疗组分别于第一次注射月桂酸钠完毕后，立刻静脉注入三种剂量的RES0.3m1左右，随后的四天每日一次静脉给药。CON组则给予0.04%(v/v)丙

5、二醇0.3m1。此实验中，只用姿势反射试验进行行为学评价。实验第六天完成神经功能评价后，取脑，每隔2mm冠状切片(511m)。第三片包含海马区。脑片用Luxolfastblue-HE染色以行梗塞面积定量和组织学分析。数据用平均值士标准误表示。应用SPSS统计软件包中的单因素方差分析对数据处理。神经功能评分用Chi-square检验。结果:第一部分:A组大鼠冠状脑片Luxolfastblue-HE染色显示有多发小梗塞灶，病灶分布于注药侧的皮质、海马、丘脑，呈淡染表现。B组两侧半球及A组对侧半球未见梗塞灶。C组于第一次注射月桂酸钠后5h，光镜下PTAH染色可见某些大脑区域血管

6、灌注良好，某些区域的血管被含有血栓的成分堵塞，被堵管腔内微血栓包含有纤维蛋白丝和血小板。一些小动脉内皮细胞损害，周围脑组织水肿。第一次注入月桂酸钠后lh和5h透射电镜证实注药侧毛细血管内皮细胞损伤，两个时间段损伤程度基本相同。部分管腔内有脱落坏死的内皮细胞及细胞碎片。电镜下可见到星形细胞足突肿胀，神经元固缩和血脑屏障破坏。但未看到血管内血栓。假手术大鼠脑组织未见内皮细胞损伤和血栓形成。注药侧大脑中动脉无内皮细胞损伤和血栓形成。第一次注射月桂酸钠后48h(实验第三天)，A组可观察到40%的大鼠有轻重度神经功能缺损;第二次注射月桂酸钠后3天(实验第六天)，有73.3%大鼠有神

7、经功能缺损。而B组大鼠均无神经功能缺损。实验第三天，A组肢体不对称应用试验分数为0.23士0.03,B组为一0.01士0.05,两组有显著性差异(p=0.000)。角落试验A组与B组相比，A组大鼠向右转(无偏瘫侧)的比率明显增多，比值分别为84士4%,49士2.5%。两者有显著差异(p=0.000)。实验第六天，A组肢体不对称应用试验分数上升为0.28士0.05,B组为0.005士0.012，两组有显著性差异(p=0.000).A组角落试验分数为88士4%,B组为50士2%，两者有显著性差异(P=0.000)。分别对第三天和第