不同采收期绿衣枳壳中柚皮苷的含量测定

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1、不同采收期绿衣枳壳中柚皮苷的含量测定【摘要】目的采用高效液相色谱法测定不同采收期绿衣枳壳中柚皮苷的含量,确定绿衣枳壳的最佳采收时期。方法色谱柱为HypersilODSC18(4.6mm×250mm,25μm),柱号1612774,流动相为乙腈-0.1%磷酸(21∶79),检测波长为283nm,流速1.0mL/min。结果柚皮苷在0.1644～0.8320μg范围呈良好的线性关系,回归方程为Y＝156681X-84834(r＝0.9999),平均回收率为98.49%,RSD＝2.68%。结论该方法简便、快速、灵敏、准确、重复性好,可作为枳壳中柚皮苷的含量测定方法。绿衣枳壳宜于6月初－

2、6月中旬采集。【关键词】高效液相色谱法；采收期；绿衣枳壳；柚皮苷；含量测定Keywords：HPLC；collecttime；fructusponciritrifoliatae；naringin；contentdetermination6绿衣枳壳属福建省道地药材,因品质优良,长期以来远销我国台湾地区、以及韩国、东南亚各国,是福建省极具发展前途、可用于出口创汇的优质传统药材。然而,植物类药材因其入药的花、叶、根、茎、实的采收季节均有严格的限定,提早或延期采收或采收后不及时进行加工处理,都直接关系到有效成分的含量或变异。本试验选用福建闽候地区不同采收时期的绿衣枳壳药材,通过对不同采收时

3、期的绿衣枳壳中柚皮苷的含量进行比较,确定绿衣枳壳的最佳采收时期。现报道如下。1仪器与试药岛津LC-10AT型双泵高效液相色谱仪,包括CBM-102真空脱气机、LC-10AT泵、SPD-10A检测器。乙腈(HPLC级,Merck)；其他试剂均为分析纯；水为重蒸水。柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号722-8803)；绿衣枳壳样品(经福建省药品检验所鉴定为FructusPonciriTrifoliatae)。2色谱条件色谱柱为HypersilODSC18(250mm×4.6mm,25μm,大连依利特科学仪器公司)；流动相为乙腈-0.1%磷酸(21∶79)；检测波长为283nm；

4、流速为1.0mL/min；柱温为室温；进样量为20μL[1-2]。理论塔板数按柚皮苷峰计算应不得低于2000。色谱图见图1。　　3方法与结果　　3.1对照品溶液的制备6精密称取柚皮苷对照品5.2mg,置25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,并从其中精密吸取10.0mL,加甲醇至刻度,摇匀,即得。制成83.2μg/mL的对照品溶液。　　3.2供试品溶液的制备取枳壳药材粉末,取约1g,精密称定,置索氏提取器中,加石油醚适量,置水浴中加热回流3h,弃去石油醚液,药渣挥干。再置索氏提取器中,加甲醇适量,水浴加热回流至提取液无色,放冷,移至100mL量瓶中,用少量甲醇分次洗涤容器,洗液并入同一

5、量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。精密量取5mL,置25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得[3]。　　3.3线性关系考察取“3.1”项中的储备液,分别精密量取该储备液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL于10mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀。按上述色谱条件进行测定。以对照品溶液进样量(μg)为横坐标,峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线,线性方程为Y＝156681X－84834,r＝0.9999。柚皮苷在0.1664～0.8320μg范围具有良好的线性关系。　　3.4精密度试验6取上述对照品溶液20μL,连续进样5次,测得柚皮苷峰面积积分值,RSD＝0.47%。结果表明精密度良

6、好。　　3.5重复性试验取同一枳壳药材约1.0g,精密称定5份,按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积积分值,RSD＝2.90%。结果表明该方法重复性良好。　　3.6稳定性试验取同一批供试品溶液,分别在制备后室温下放置2、6、10、16、24h,按上述色谱条件测定峰面积,RSD＝1.93%。结果表明供试品在室温下24h内基本稳定。　　3.7回收率试验　　采用加样回收法,取已知含量的绿衣枳壳约1.0g(含量1.28535%),精密称定,分别精密加入柚皮苷对照品6.4mg,按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积值,计算回收率。结果见表1。表1绿衣枳壳中柚皮苷回收率测定结果（略

7、）　　3.8样品含量测定6　　分别取5月中旬、5月底、6月初、6月中旬、6月底采收的绿衣枳壳药材约1.0g,精密称定,按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积积分值。结果见表2。表2不同采收期绿衣枳壳中柚皮苷的含量测定结果（略）　　4讨论实验室常用枳壳黄酮类成分的提取方法有：甲醇直接回流法、超声波法[4-5]、药典法[6]、索氏提取法[3],其中索氏提取法提取柚皮苷高达3.47%,效率最高,故选之。　　5月采收的绿衣枳壳中柚皮苷的含量明显比6月的低,6月初－6月中旬