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1、不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量测定【关键词】连翘；金钟花；连翘酯苷；连翘苷；含量测定KeyaLindl；forsythiaside；forsythin 连翘是历史悠久、使用广泛的一种中药,具有清热解毒、消肿散结的功效。我国药典收载的连翘为木犀科连翘属植物连翘Forsythiasuspense(Thunb.)Vahl的干燥果实,主产于山西、河南、陕西[1]。对全国大部分地区使用的商品连翘调查发现,在少数地区有将同属植物金钟花F.viridissimaLindl.的果实混作连翘使用现象[2]。另外,近几年在连翘的主产区皆出现了“抢青”现象,产区“采青”时间过长
2、,采收混乱,造成连翘品质差异较大,严重影响了连翘的质量和产量[3]。基于上述现象,本研究比较了不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量,为中药连翘的质量控制提供理论依据。 1材料 1.1仪器与试剂 美国BECKMAN高效液相色谱仪,125型泵,168型PDA检测器,32Karat色谱工作站；HAMILTON微量进样器(HAMILTON公司)；微孔滤膜φ＝13mm,0.45μm(天津市色谱科学技术公司)；YCQ-300型超声波清洗器(上海凯波超声设备有限公司)。甲醇为色谱纯,水为双蒸水并经0.45μm水系滤膜过滤。 1.2样品 连翘酯苷、连翘苷对照品均为自行分
3、离精制,并经UV、IR、NMR鉴定结构,HPLC检测,面积归一化法计算纯度,均大于99%。选西安医学院种植的连翘和金钟花为样株(经西北大学生命科学学院王亚洲副教授鉴定为Forsythiasuspensa(Thumb.)Vahl和F.viridissimaLindl.,果实具体采收时间见表1。50℃干燥至恒重后,研成粉末,过2O目筛,备用。表1连翘、金钟花果实样品采集情况(略) 2方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Diamonsil-C18(5μm,4.6mm×250mm)。流动相：A-水,B-甲醇；B相洗脱梯度：0～14min,34.6%；14～15min,
4、34.6%～43.5%；15～23min,43.5%；23～24min,43.5%～45%；24～34min,45%；34～36min,45%～80%；36～40min,80%；流速：1mL/min。柱温：室温28℃；灵敏度0.02AUFS；检测波长270nm。理论塔板数以连翘酯苷计应不低于3300,以连翘苷计应不低于7600。色谱图见图1。 2.2对照品溶液的制备分别精密称取连翘酯苷和连翘苷对照品9.86、4.40mg置于10mL量瓶中,用60%甲醇定容至刻度,置于冰箱中(4℃)保存备用。 2.3供试品溶液的制备精密称取不同采收期连翘、金钟花果实的干燥粉末各约1.000g
5、置于具塞三角瓶中,精确加入甲醇30mL,精密称质量,超声提取30min后,用甲醇补足质量,加20mL双蒸水,混匀,用微孔滤膜(4.5μm)过滤,作为供试品溶液。 2.4标准曲线及线性范围的考察精密吸取上述混合对照品溶液3、5、10、20、40、50μL,进样测定,按上述色谱条件测定峰面积,按外标法以进样量X(μg)对峰面积Y进行回归,得连翘酯苷和连翘苷的回归方程,分别为：Y＝582121X－816019,r＝0.9997；Y＝580793X－33182,r＝0.9998。结果表明,连翘酯苷进样量在2.96～49.30μg、连翘苷进样量在1.32～22.00μg范围内与峰面积呈
6、良好的线性关系。 2.7重复性试验取同一连翘果实(LQ-1)样品6份,制备供试品溶液,各取20μL进样,测定峰面积,计算,连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为2.00%、0.68%。 2.8稳定性试验精密吸取混合对照品溶液20μL分别于配制后的0、4、8、16、24、48h内进样,测定峰面积。计算连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为1.61%、1.96%。结果表明,对照品溶液在48h内稳定。 2.9加样回收率试验准确称取同一连翘果实(LQ-1)样品6份,其中5份分别定量加入连翘酯苷、连翘苷的混合对照品溶液,待自然挥干后,按供试品溶液制备方法操作,并按上述色谱条件测定峰面积,计算连翘酯
7、苷、连翘苷的平均回收率分别为100.79%、100.31%,RSD分别为0.33%、0.36%。 2.10样品中连翘酯苷、连翘苷的含量测定取连翘各部位的干燥粉末,按供试品溶液制备方法操作,按照色谱条件测定峰面积,以外标法计算含量,结果见表2。表2样品含量测定结果(略) 3讨论 3.1检测波长的选择 采用二极管阵列检测器对检测波长进行了考察,分别提取并观察230、254、270、280、324、365nm波长处的色谱图[4]。结果发现230、254、280nm处其他物质的吸收较强,干扰
