参芪复方对gk大鼠大血管病变内皮细胞凋亡影响的实验研究

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1、参芪复方对GK大鼠大血管病变内皮细胞凋亡影响的实验研究作者：陈敏，庄灿，谢春光，刘桠，高泓【摘要】　　目的观察参芪复方对GK大鼠大血管病变血管内皮细胞凋亡的影响。方法设GK组、模型组、阿托伐他汀组、参芪复方组及Wistar正常对照组，各组大鼠灌胃及喂饲相应药物或饲料35d。原位末端标记Tunel法观察内皮细胞平均荧光强度，进行内皮细胞凋亡程度评价，免疫组组织化学染色（SP法）测定caspase-3阳性物质积分光密度情况。结果阿托伐他汀组、参芪复方组内皮细胞平均荧光强度、内皮细胞凋亡程度、caspase-3积分光密度均低于模型组（P＜0.05或P＜0.01），

2、阿托伐他汀组、参芪复方组间比较无差异。结论抑制主动脉血管内皮细胞凋亡及caspase-3表达可能是参芪复方防治糖尿病大血管早期病变的机制之一。【关键词】参芪复方；糖尿病大血管病变；内皮细胞凋亡；caspase-310　　2004年《中国糖尿病防治指南》明确提出：糖尿病大血管病变已经成为我国糖尿病发病率和致死率最高、危害最大的慢性并发症，并且指出糖尿病动脉内皮细胞功能障碍、动脉内皮损伤，继之对血管损伤的反应提早发生和加速动脉粥样硬化是增加冠心病事件及死亡的重要原因［1］。现在认为糖尿病大血管并发症的主要病理过程是动脉粥样硬化，糖尿病人群大血管病变的发生与非糖尿

3、病人群比具有发病更早，范围更广、病情更重的特点［2］。参芪复方是谢春光教授根据中医理论，针对消渴病气阴两虚、燥热津伤、瘀血阻滞之基本病机，具有益气养阴活血功效的自拟方。该方主要由人参、黄芪、生地黄、天花粉、山茱萸、山药、丹参、制大黄等8味中药组成。既往研究发现本方有抗2型糖尿病早期动脉粥样硬化的作用［3］。本研究在既往研究的基础上观察参芪复方对GK大鼠大血管病变内皮细胞凋亡影响。　　1材料与仪器　　1.1动物5月龄SPF级自发性2型糖尿病GK雄性大鼠85只和雄性Wistar大鼠20只［购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，质量合格证号：SCXK（沪）2007～

4、0005］，按2～3只笼饲养于四川省医学科学院﹠四川省人民医院实验动物中心，独立通气笼具（IVC）系统内。　　1.2药品与试剂参芪复方浸膏（1g浸膏相当于原生药10g，由四川省中医药研究院中医研究所药剂科生产，批号：080928），阿托伐他汀钙片（10mg/片，北京嘉林药业股份有限公司产品，批号：080502），Nω-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME，sigma公司产品，批号：107K101055），原位细胞凋亡检测（POD试剂盒，美国Roche生产，货号：11684817910），浓缩型DAB试剂盒（中杉金桥产品，货号：ZLI-9031），半胱胺酸蛋白酶

5、蛋白-3（Caspase-3，北京博奥森产品，批号：03-297）。　　1.3仪器光学显微镜（MoticBA200双目生物显微镜，麦克奥迪实业集团中国有限公司产品），明视场显微镜（Bx-40型，日本Olympus公司产品），荧光活体微循环显微镜（Ax70型，日本Olympus公司产品），Mias-2000图象分析系统(四川大学智胜软件股份有限公司)等。　　2方法　　2.1分组及造模85只GK大鼠适应性饲养1周后，随机血糖值11.1mmol·L-1以上者73只入选本实验，查随机排列表将其随机分为GK组18只、模型组（简写为model）19只、西药阿托伐他汀组（

6、简写为atorvastatin）18只、中药参芪复方组（简写为SQCR）18只，Wistar大鼠20只中剔除血糖值在6.7mmol·L-1者2只，其余18只作为正常Wistar对照组（简写为Wistar），共5组。模型、西药、中药组均给予一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂-L-NAME0.1mg·ml-1·d-1，加入饮用水中进行造模，GK、模型、西药、中药组喂饲高脂饲料，高脂饲料配方为：普通饲料88.2%、精练猪油10%、胆固醇1.510%、猪胆盐0.3%，由四川省中医药科学院实验动物中心制成块料，Wistar组喂饲普通饲料。　　2.2给药方法造模同时开始给药

7、，周期35d。具体如下：①正常Wistar对照组：按5ml·kg-1·d-1灌服生理盐水；②GK组：按5ml·kg-1·d-1灌服生理盐水；③模型组：按5ml·kg-1·d-1灌服生理盐水；④atorvastatin组：按1.6mg·kg-1·d-1(相当于成人剂量10倍，成人体质量按60kg计)体质量灌服阿托伐他汀钙悬液；⑤SQCR组：按1.44g·kg-1·d-1(相当于成人剂量的10倍，成人按60kg计)体重灌服中药混悬液。　　2.3观察指标及检测方法动物给药35d后处死，腹腔注射8%戊巴比妥钠麻醉动物，取主动脉，冰上除去主动脉周围组织和腔内血液，固定

8、组织，备免疫组织化学染色及原位末端标记Tunel法检