异丙酚对大鼠急性自体血栓肺栓塞的保护作用

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1、异丙酚对大鼠急性自体血栓肺栓塞的保护作用作者：霍华治苏春勇马小刚【摘要】　　目的观察异丙酚对急性自体血栓肺栓塞大鼠的保护作用及机制。方法制备急性自体血栓肺栓塞模型，大鼠分为正常对照组、模型组、异丙酚低、中、高剂量组(4,8,16mg·kg-1·h-1)。进行血气分析；检测肺系数、肺组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性；放射免疫法检测血液中内皮素（ET1）、血栓烷素2（TXB2）含量；RTPCR和Western印迹方法检测肺表面活性蛋白A（SPA）mRNA及蛋白的表达。结果异丙酚能升高血氧分压、血二氧化碳分压水平、SOD活性、SPAmR

2、NA和蛋白表达；降低肺系数、MDA、ET1、TXB2含量。结论异丙酚对急性肺栓塞大鼠有保护作用。【关键词】异丙酚；肺栓塞；肺表面活性蛋白A10　　急性肺栓塞是一种误诊率和病死率很高的疾病，且随着年龄增加其发病率和死亡率愈高〔1〕。异丙酚是一种较新型的静脉麻醉药物，在发挥麻醉效应的同时，因其静脉输入，可对全身组织产生不同的影响。已有研究表明异丙酚对急性肺栓塞有保护作用〔2〕，但在急性自体血栓肺栓塞中的作用研究不多，而自体血栓的形成和临床肺栓塞症血栓的形成具有一定的相似性，能更真实地反映疾病的病理生理改变，因此本文通过制备大鼠自体血栓急性肺栓塞模型来研究异丙酚对急

3、性肺栓塞的作用并初步探讨其机制。　　1材料与方法　　1.1材料与试剂　　SD大鼠，清洁级，雄性，280～300g，由河北省实验动物中心提供，异丙酚由四川蜀乐药业股份有限公司提供，肺表面活性蛋白A（SPA）引物由上海生工生物技术公司合成，抗SPA单克隆抗体购自Sigma公司。　　1.2大鼠肺栓塞模型建立〔3〕　　尾静脉取血0.2ml，37℃水浴箱内过夜，次日分割成5mm×1mm的栓子，放入2ml的注射器内备用。大鼠用20%乌拉坦麻醉，颈正中切开，分离右侧颈总静脉，采用导管方法将混有15个血栓的2ml生理盐水注入静脉。注入血栓后可见大鼠明显发绀，呼吸加快。　　1

4、.3动物分组与给药10　　SD大鼠40只，随机分为正常对照组、模型组、异丙酚低剂量：4mg·kg-1·h-1、异丙酚中剂量：8mg·kg-1·h-1、异丙酚高剂量组：16mg·kg-1·h-1。每组8只动物。除正常对照组外，各组注入栓子，异丙酚各组再分别继续输注异丙酚4、8、16mg·kg-1·h-1(用5%葡萄糖稀释)4h，模型组继续输注5%葡萄糖2ml/h。对照组颈静脉输注生理盐水。输注异丙酚4h时，腹主动脉取血处死动物。　　1.4检测指标与方法　　1.4.1血气分析　　各组实验动物于栓塞前、栓塞后、输注异丙酚后，分别颈总动脉取血作血气分析。　　1.4.2肺系

5、数　　仔细切除肺外支气管和脂肪组织，称肺重，计算肺系数=肺重/体重。　　1.4.3丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性测定10　　称取一块肺组织，匀浆，离心，取上清，按试剂盒的要求采用比色法测定。　　1.4.4内皮素　　1（ET1）和血栓烷素2（TXB2）含量测定取全血，按说明采用放射免疫法测定。血栓素（TXA2）生物半衰期短，迅速代谢为稳定而基本无活性的TXB2，难以直接测定，国内外均以测定TXB2作为判断其浓度的指标。　　1.4.5肺组织形态学变化　　常规苏木素尹红（HE）染色。　　1.4.6大鼠肺组织肺表面活性蛋白（SPA）mRNA

6、及蛋白检测　　1.4.6.1RTPCR方法检测SPAmRNA表达　　①提取肺组织总RNA；②进行逆转录；③PCR扩增SPA目的片段，引物序列：SPA上游引物：5′CCTTCACCCTCTTCTTGACTGT3′，下游引物：5′CAATGTTGCCTCCTGCTCTG3′。βactin上游引物：5′CAGGGTGTGATGGTGGG3′，下游引物：5′10GGAAGAGGATGCGGCAG3′。PCR条件为95℃5min,预变性后，95℃30s，58℃30s,72℃30s,25个循环后，72℃延伸5min。PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶

7、电泳分离，扫描成像，用凝胶成像分析系统进行密度分析。βactin作为内参照。　　1.4.6.2Western印迹法检测SPA蛋白的表达　　取肺组织提取蛋白质，定量，聚丙烯酰胺凝胶电泳，电转移至PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭，用抗SPA单克隆抗体（1∶400）或βactin单克隆抗体（1∶800）4℃孵育过夜，PBS漂洗三次后加二抗辣根过氧化酶（HRP)IgG(1∶1000)，室温孵育2h，化学发光法显色，显色终止后在Labworks软件下对条带进行吸光度积分扫描。βactin作为内参照。　　1.5统计学分析　　数据以x±s表示，采用SPSS11.5软件进

8、行ANOV