探讨异丙酚对大鼠急性自体血栓肺栓塞的保护作

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1、探讨异丙酚对大鼠急性自体血栓肺栓塞的保护作摘要：目的观察异丙酚对急性自体血栓肺栓塞大鼠的保护作用及机制。方法制备急性自体血栓肺栓塞模型，大鼠分为正常对照组、模型组、异丙酚低、中、高剂量组(4,8,16mg·kg-1·h-1)。进行血气分析；检测肺系数、肺组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性；放射免疫法检测血液中内皮素（ET1）、血栓烷素2（TXB2）含量；RT睵CR和DA、ET1、TXB2含量。结论异丙酚对急性肺栓塞大鼠有保护作用。关键词：异丙酚；肺栓塞；肺表面活性蛋白睞　　急性肺栓塞是一种误诊率和病死率很高的疾病，且随着年龄

2、增加其发病率和死亡率愈高〔1〕。异丙酚是一种较新型的静脉麻醉药物，在发挥麻醉效应的同时，因其静脉输入，可对全身组织产生不同的影响。已有研究表明异丙酚对急性肺栓塞有保护作用〔2〕，但在急性自体血栓肺栓塞中的作用研究不多，而自体血栓的形成和临床肺栓塞症血栓的形成具有一定的相似性，能更真实地反映疾病的病理生理改变，因此本文通过制备大鼠自体血栓急性肺栓塞模型来研究异丙酚对急性肺栓塞的作用并初步探讨其机制。　　1材料与方法　　1.1材料与试剂　　SD大鼠，清洁级，雄性，280～300g，由河北省实验动物中心提供，异丙酚由四川蜀乐药业股份有限公司提供，肺表

3、面活性蛋白睞（SP睞）引物由上海生工生物技术公司合成，抗SP睞单克隆抗体购自Sigma公司。　　1.2大鼠肺栓塞模型建立〔3〕　　尾静脉取血0.2ml，37℃水浴箱内过夜，次日分割成5mm×1mm的栓子，放入2ml的注射器内备用。大鼠用20%乌拉坦麻醉，颈正中切开，分离右侧颈总静脉，采用导管方法将混有15个血栓的2ml生理盐水注入静脉。注入血栓后可见大鼠明显发绀，呼吸加快。内容来自.nseac.　　1.3动物分组与给药　　SD大鼠40只，随机分为正常对照组、模型组、异丙酚低剂量：4mg·kg-1·h-1、异丙酚中剂量：8mg·kg-1·h-1、

4、异丙酚高剂量组：16mg·kg-1·h-1。每组8只动物。除正常对照组外，各组注入栓子，异丙酚各组再分别继续输注异丙酚4、8、16mg·kg-1·h-1(用5%葡萄糖稀释)4h，模型组继续输注5%葡萄糖2ml/h。对照组颈静脉输注生理盐水。输注异丙酚4h时，腹主动脉取血处死动物。　　1.4检测指标与方法　　1.4.1血气分析　　各组实验动物于栓塞前、栓塞后、输注异丙酚后，分别颈总动脉取血作血气分析。　　1.4.2肺系数　　仔细切除肺外支气管和脂肪组织，称肺重，计算肺系数=肺重/体重。　　1.4.3丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的

5、活性测定　　称取一块肺组织，匀浆，离心，取上清，按试剂盒的要求采用比色法测定。　　1.4.4内皮素　　1（ET1）和血栓烷素2（TXB2）含量测定取全血，按说明采用放射免疫法测定。血栓素（TXA2）生物半衰期短，迅速代谢为稳定而基本无活性的TXB2，难以直接测定，国内外均以测定TXB2作为判断其浓度的指标。　　1.4.5肺组织形态学变化　　常规苏木素惨红（HE）染色。　　1.4.6大鼠肺组织肺表面活性蛋白（SP睞）mRNA及蛋白检测　　1.4.6.1RT睵CR方法检测SP睞mRNA表达　　①提取肺组织总RNA；②进行逆转录；③PCR扩增SP睞目

6、的片段，引物序列：SP睞上游引物：5′睠CTTCACCCTCTTCTTGACTGT3′，下游引物：5′睠AATGTTGCCTCCTGCTCTG3′。β瞐ctin上游引物：5′睠AGGGTGTGATGGTGGG3′，下游引物：5′睪GAAGAGGATGCGGCAG3′。PCR条件为95℃5min,预变性后，95℃30s，58℃30s,72℃30s,25个循环后，72℃延伸5min。PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离，扫描成像，用凝胶成像分析系统进行密度分析。β瞐ctin作为内参照。　　1.4.6.2Western印迹法检测SP睞蛋白的表达

7、　　取肺组织提取蛋白质，定量，聚丙烯酰胺凝胶电泳，电转移至PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭，用抗SP睞单克隆抗体（1∶400）或β瞐ctin单克隆抗体（1∶800）4℃孵育过夜，PBS漂洗三次后加二抗辣根过氧化酶（HRP)睮gG(1∶1000)，室温孵育2h，化学发光法显色，显色终止后在Labworks软件下对条带进行吸光度积分扫描。β瞐ctin作为内参照。　　1.5统计学分析　　数据以x±s表示，采用SPSS11.5软件进行ANOVA分析处理和Dun′t检验。　　2结果　　2.1血气分析　　栓塞后，各栓塞组血氧分压（PO2）和血二氧化碳分压（PC

8、O2）明显下降，与正常对照组比较差异有显著性（P