chk2反义寡核苷酸对顺铂作用下hela细胞凋亡的影响

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1、chk2反义寡核苷酸对顺铂作用下HeLa细胞凋亡的影响作者：朱克修，王佳，李玢，曹亚莉，韩晓兵【摘要】目的观察宫颈癌HeLa细胞转染chk2反义寡核苷酸后，在顺铂作用下对凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂作用人宫颈癌细胞株HeLa24、48、72h后对细胞的生长抑制率。以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞，用Westernblot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达，用流式细胞仪和TUNEL法检测顺铂作用后细胞凋亡率。结果顺铂对HeLa细胞有生长抑制作用，并有时间和浓度依赖性；反义ch

2、k2转染后可明显抑制Chk2蛋白表达(P<0.01)，顺铂作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(P<0.01)。结论反义寡核苷酸封闭chk2基因可增加HeLa细胞对顺铂的凋亡敏感性。【关键词】chk2基因；反义核酸技术；宫颈癌；顺铂　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethechangeofantisenseoligodeoxynucleotidetargetingchk2apoptosisincervicalcancercellsHeLainducedbycisplast

3、in(DDP).MethodsTheproliferation-inhibitingratesofHeLacellsinducedbyDDPindifferentconcentrationweremeasuredbyMTTassays.13OligonucleotidewastransfectedintoHeLacellsbyliposome.TheexpressionofChk2wasobservedbyWesternblot.TheapoptosisrateofHeLacellsinducedbyDDPwas

4、investigatedbyflowcytometerandTUNEL.ResultsThegrowthinhibitionrateofHeLacellsincreasedgradually,whichwasdependentonthedosageofDDPandtheactiontime.Transfectionwithantisenseoligonuleotidetargetingchk2couldinhibittheexpressionofChk2protein(P<0.01),andtheapopt

5、osisratewassignificantlyhigherthanthatofthesenseblocking(P<0.01).ConclusionAntisenseblockingofchk2couldincreasetheapoptoticsensitivityofHeLacellstoDDP.　　KEYWORDS:chk2gene;antisensenucleicacidtechnology;cervicalcancer;cisplastin(DDP)宫颈癌是世界范围内女性第二大恶性肿瘤。近年来,随

6、着肿瘤化学治疗的基础与临床研究的迅速发展,化疗药物的不断开发及给药途径和方法的改进,以顺铂(cisplatin,13DDP)为核心的联合化疗在宫颈癌治疗中取得了一定进展，然而肿瘤细胞的多耐药性成为肿瘤化疗失败的重要原因。肿瘤细胞逃避凋亡是宫颈癌化疗耐药的一个重要因素，放、化疗作用下肿瘤细胞周期检查点激活，导致细胞周期阻滞和细胞的损伤修复，而使细胞避免凋亡。目前研究认为细胞周期检测点途径主要由ATM(ataxiatelangiectasiamutant)、ATR-Chk1/2-Cdc25A、Cdc25B、Cdc25

7、C轴组成［1］。细胞周期检测点激酶2(checkpointkinase2,Chk2)属于丝氨酸/苏氨酸激酶,是细胞周期检测中最关键的效应蛋白激酶［2］。因此，以chk2为作用靶点,干扰细胞损伤修复机制,提高肿瘤治疗的敏感性可能成为一种有效的治疗选择。本研究通过检测chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导的HeLa细胞凋亡的影响，探讨chk2能否作为宫颈癌增敏治疗的有效靶点。　　1材料与方法　　1.1材料　　人宫颈癌HeLa细胞株由西安交通大学医学院第一附属医院临床研究医学分子中心提供，在37℃，50mL/L的CO2条件下用

8、含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基培养。RPMI1640购自GIBCO公司，胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。MTT购自Amressco公司，转染试剂Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司。鼠抗人Chk2单克隆抗体购自Neomarkers公司，辣根酶标记的羊抗鼠抗体购自博士德公司，ECL购自AmershamBioscie