固相萃取高效液相色谱电喷雾串联质谱法分析芍药和酒芍药的水溶性化学成分

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1、固相萃取高效液相色谱电喷雾串联质谱法分析芍药和酒芍药的水溶性化学成分作者：何忠梅孙佳明张辉王华【摘要】利用固相萃取高效液相色谱电喷雾串联质谱法(SPEHPLCDADESIMS2)分析了芍药(PaeonialactifloraPall.)及其炮制品酒芍药(PaeonialactifloraPall.preparatedwithwine)水煎液中化学成分的种类和结构，并对其主要有效成分芍药苷进行了定量测定。用此方法得到了芍药和酒芍药水煎液的紫外色谱(UV)图、总离子流色谱(TIC)图和萃取离子色谱(EIC)图，以及相应色谱峰的紫外光谱图和EIC/M

2、S2的质谱图。对其进行解析，发现芍药和酒芍药水煎液中所含化学成分基本一致，但酒芍药水煎液中除主要活性成分芍药苷含量基本未变外，其它酚酸性化学成分含量相对于芍药水煎液均有不同程度的下降。同时鉴别出芍药和酒芍药水煎液中共同含有的16种成分，它们分别是：蔗糖、(+)儿茶素、MudanpiosideE、芍药新苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、芍药苷、羟基芍药苷、没食子酰芍药苷*、牡丹皮苷Ⅰ、苯甲酰芍药苷、三没食子酰葡萄糖、四没食子酰葡萄糖、五没食子酰葡萄糖。以上分析说明，酒炙可保留芍药的药效，同时“缓和其酸寒伐肝之性”。【关键词】芍药,固相萃取,高效液相色谱,电喷雾串联质

3、谱,水溶性9　1引言　　中药芍药是毛茛科芍药亚科芍药属多年生草本植物芍药(PaeonialactifloraPall.)的干燥根。具有免疫调节、镇痛、镇静、解痉、保肝、扩张血管、抗炎等作用。芍药的主要有效成分为单萜及单萜甙类化合物，根据基本骨架可分为具有笼状蒎烷结构的单萜及单萜甙类化合物和具有内酯结构的单萜及单萜甙类化合物。芍药根中还含有部分三萜化合物以及鞣质等[1]。　　芍药生品味苦、酸，性微寒。芍药酒炙后酸寒伐肝之性降低[2]。近年来，对芍药中化学成分的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、薄层扫描法(TLCS)和高效液相色谱电喷雾串联质谱法(HPL

4、CMS)[3～5]。而对于经过炮制后的酒芍药的化学成分的研究主要集中在使用高效液相色谱结合标准品对芍药主要单萜苷类化合物芍药苷的定量研究上。而高效液相色谱(HPLC)与二极管阵列紫外检测器(DAD)及电喷雾电离质谱联用技术(HPLCDADESIMS2)现已成为植物粗提物中成分分离和定性分析的强有力工具[6]。固相萃取(SPE)技术用于水溶性样品纯化和浓缩[7]。本实验利用固相萃取高效液相色谱电喷雾串联质谱法(SPEHPLCDADESIMS2)技术对芍药和酒芍药水煎液中化学成分进行分析，为芍药的传统炮制机理的科学内涵提供了进一步的实验依据。9

5、　　2实验部分　　2.1仪器与试剂　　1100型LCMSD液质联用仪(美国安捷伦公司)，包括AgilentSL型多级离子阱质谱仪、低压四元梯度泵、二极管阵列检测器(DAD)、自动进样、柱温箱、Chemistation化学工作站等;GL20GH型低温超速离心机;BP211D型十万分之一电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);固相萃取(SPE)小柱(北京艾杰尔科技有限公司)。　　芍药(长春北京同仁堂药店)经鉴定为毛茛科芍药亚科芍药属多年生草本植物芍药的干燥根。乙腈、甲醇和甲酸为色谱纯(Fisher公司);水为超纯水(MilliQ公司)。　　2.2样品制备　　

6、2.2.1酒芍药的制备取芍药片10g，加入黄酒1.0g，稍闷润，待酒被吸尽后，置炒制容器内，用文火加热，炒干，取出晾凉，备用。　　2.2.2芍药和酒芍药水煎液的制备将芍药和酒芍药各109g粉碎，粗粉分别加20倍量水浸泡30min，微沸提取2次，提取时间分别为40和20min，过滤，合并滤液，浓缩，定容到100mL。　　2.2.3芍药和酒芍药水煎液SPE前处理以1mL甲醇活化固相萃取小柱，用1mL水平衡。将上述水煎液样品1mL上柱，用1mL水洗脱杂质，再加1mL甲醇洗脱，收集洗脱液。甲醇洗脱液过0.22μm膜，供高效液相电喷雾质谱联用仪分析。　2.3色谱和质谱

7、条件　　AgilentZORBAXSBC18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm);流动相：甲醇/乙腈(含0.1%甲酸)/0.1%甲酸水溶液三元线性梯度洗脱，流动相梯度设置见表1。流速：0.6mL/min;检测波长：230nm;柱温：30℃;进样量：10μL。表1高效液相色谱流动相梯度表　　3结果与讨论　　3.1芍药和酒芍药水煎液中化学成分的色谱研究　　实验结果表明，经甲醇/乙腈(含0.1%甲酸)/0.1%甲酸水溶液三元线性梯度洗脱，芍药和酒芍药水煎液中化学成分得到了较理想的分离效果，二者HPLCDADUV2图及其对应的HPLCESI9TIC总离子

8、流色谱图见图1。　　图1芍药(A)和酒