固相萃取高效液相色谱电喷雾串联质谱法分析芍药和酒芍药的水溶性化学成分论文

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1、固相萃取高效液相色谱电喷雾串联质谱法分析芍药和酒芍药的水溶性化学成分论文.freelistation化学工作站等;GL20GH型低温超速离心机;BP211D型十万分之一电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);固相萃取(SPE)小柱(北京艾杰尔科技有限公司)。芍药(长春北京同仁堂药店)经鉴定为毛茛科芍药亚科芍药属多年生草本植物芍药的干燥根。乙腈、甲醇和甲酸为色谱纯(Fisher公司);水为超纯水(MilliQ公司)。2.2样品制备2.2.1酒芍药的制备取芍药片10g，加入黄酒1.0g，稍闷润，待酒被吸尽后，置炒制容器内，用文火加

2、热，炒干，取出晾凉，备用。2.2.2芍药和酒芍药水煎液的制备将芍药和酒芍药各10g粉碎，粗粉分别加20倍量水浸泡30min，微沸提取2次，提取时间分别为40和20min，过滤，合并滤液，浓缩，定容到100mL。2.2.3芍药和酒芍药水煎液SPE前处理以1mL甲醇活化固相萃取小柱，用1mL水平衡。将上述水煎液样品1mL上柱，用1mL水洗脱杂质，再加1mL甲醇洗脱，收集洗脱液。甲醇洗脱液过0.22μm膜，供高效液相电喷雾质谱联用仪分析。2.3色谱和质谱条件AgilentZORBAXSBC18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm);流

3、动相：甲醇/乙腈(含0.1%甲酸)/0.1%甲酸水溶液三元线性梯度洗脱，流动相梯度设置见表1。流速：0.6mL/min;检测波长：230nm;柱温：30℃;进样量：10μL。表1高效液相色谱流动相梯度表3结果与讨论3.1芍药和酒芍药水煎液中化学成分的色谱研究实验结果表明，经甲醇/乙腈(含0.1%甲酸)/0.1%甲酸水溶液三元线性梯度洗脱，芍药和酒芍药水煎液中化学成分得到了较理想的分离效果，二者HPLCDADUV2图及其对应的HPLCESITIC总离子流色谱图见图1。图1芍药(A)和酒芍药(B)水煎液中化学成分的高效液相色谱图和

4、总离子流图Fig.1HPLCchromatogramandTICchromatogramofpoundsinaqueousofPaeonialactifloraPall.andPaeonialactifloraPall.preparated，而联有没食子酰基取代的单萜苷或糖的吸收红移至280nm。3.2HPLCDADESIMS2方法测定芍药和酒芍药水煎液中的化学成分电喷雾质谱是一种软电离技术，在正离子模式下，经常同时出现M+H+,M+Na+,2M+H+,2M+Na+等一系列准分子离子峰。根据芍药和酒芍药的水煎液中化学成分准离子峰

5、可确定各化合物的分子量信息，通过碰撞诱导解离(CID)使目标化合物碎裂成碎片离子，从而可进一步获得各化合物的结构信息。例如芍药和酒芍药中共有的苯甲酰基芍药苷的准分子离子峰M+Na+(m/z607)，说明其分子量为584;在碰撞诱导解离过程中，m/z607离子失去一分子苯甲酸(122Da)生成m/z485离子;m/z607离子失去两分子苯甲酸(244Da)生成m/z363离子;m/z607离子失去一分子苯甲酰基葡萄糖(266Da)生成m/z341离子;m/z607离子失去一分子苯甲酸(122Da)和一分子苯甲酰基葡萄糖(266Da)生成

6、m/z219离子采用HPLCDADESIMS2联用技术，根据每一组分的色谱保留时间、紫外吸收特征、准分子离子峰和二级质谱碎片信息，并