hpv18型e2蛋白高表达对巨噬细胞凋亡及其分泌功能的影响

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1、HPV18型E2蛋白高表达对巨噬细胞凋亡及其分泌功能的影响作者：彭俊,朱翠明,余敏君,曹清香,王鑫,万艳平【摘要】　　目的:研究HPV18E2及其N端(TAD)、C端(DBD)与GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞（MΦ）凋亡及分泌活性的影响,为进一步研究E2蛋白在HPV18致癌机制中的作用奠定实验基础。方法:通过PCR从现有真核表达载体pEGFPC1/E2上分别扩增出TAD、DBD基因片段,并构建真核表达载体pEGFPC1/TAD、pEGFPC1/DBD。将3种真核表达载体及pEGFPC1分别转染MΦ,用倒置荧光

2、显微镜观察它们的表达与定位,并以抗GFP抗体为一抗作Westernblot检测它们的表达。通过3种融合蛋白在MФ内的瞬时高表达,在转染48h后分别检测各组细胞培养基中TNFα和IL1β的含量,并收集MΦ经染色以及流式细胞术（FCM）观察检测其凋亡。结果:GFPE2融合蛋白主要表达于细胞核,细胞质内也有表达,而GFPDBD融合蛋白仅表达于细胞核内,GFPTAD仅表达于细胞质。GFPE2、GFPTAD融合蛋白在MΦ内高表达后MΦ凋亡率上升,细胞因子TNFα和IL1β分泌量增加,且GFPTAD作用强于GFP

3、E2。而EGFPDBD无此作用。结论:HPV18E2及其TAD与EGFP融合蛋白瞬时高表达可诱导MΦ凋亡并上调其分泌细胞因子TNFα和IL1β。【关键词】人乳头瘤病毒18型E2蛋白巨噬细胞凋亡12细胞因子　　[Abstract]AIM:TostudytheeffectoftheoverexpressionofGFPE2,GFPTAD(NextremitydomainofHPV18E2)andGFPDBD(CextremitydomainofHPV18E2)ontheapoptosisandsecreti

4、onofmacrophagesandtofurtherexplorethecontributionofE2genetotheuterinecervixcancer.METHODS:TADorDBDgenewasamplifiedfrompEGFPC1/HPV18E2byPCRrespectivelyandthenclonedintopEGFPC1vector.AfterthetransfectionofrecombinantplasmidsorpEGFPC1intothemacrophages,theirexpre

5、ssionwasexaminedbyfluorescentmicroscopyandWesternblot.ThecytokinecontentofTNFαorIL1βintheculturemediumwastestedquantitativelywithELISAkitrespectively.Thestainedmacrophageswereobservedandtheirapoptosisratewastestedbyflowcytometry.RESULTS:Aftertransfectedintomacr

6、ophages,GFPE2fusionproteinwasmainlylocatedincytoplasmawhileGFPDBDfusionproteinwascompletelylocatedinnucleiandGFPTADfusionproteinwascompletelylocatedincytoplasma.TheoverexpressionofGFPE2orGFPTADincreasedthelevelofTNFαandIL1βandupregulatetheapoptosisrateofma

7、crophages.Furthermore,theeffectofGFPTADwasobviousexceptonIL1βlevelbutthe12overexpressionofGFPDBDdidnotshowthesameeffect.CONCLUSION:TheoverexpressionofGFPE2orGFPTADfusionproteincaninducetheapoptosismacrophagesandupregulateTNFαorIL1βsecretionofmacrophages.　　

8、[Keywords]HPV18;E2protein;macrophage;apoptosis;cytokine　　人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）高危型如HPV16、18等常引起重度不典型性增生,甚至恶性肿瘤[1]。HPV18是一种无包膜的环状病毒,基因全长7900bp,早期基因区编码的