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1、氧化型低密度脂蛋白对骨髓内皮前体细胞增殖、凋亡及NO分泌功能的影响作者：宗小娟，王海昌，周祥，程康【关键词】内皮祖细胞Effectofoxidizedlobonemarroarrobonemarrog/L;groupC,10mg/L;groupD,20mg/L)ediumtodetecttheeffectofoxLDLonEPCs.MTTassayultiplicationabilityofEPCs.Floetryeasuredinthecellculturemediumbynitratereductasemethodtofindtheinj
2、uryofoxLDLoncellsandcellfunctions.RESULTS:paredotedtheapoptosisofEPCs（groupB,18.35±0.08;groupC,24.22±0.07;groupD,40.37±0.13）（n=6）,anddamagedtheNOsecretingfunctionofEPCs.TheseeffectsagetheNOsecretingfunctionandpromotetheapoptosisofthecells.IthadbeenseenthatEPCsaybesomerelati
3、onshipbetg/L，C组10mg/L，D组20mg/L）作用于EPCs，MTT法检测oxLDL对EPCs增殖能力的影响，流式细胞仪检测oxLDL对细胞的凋亡率的影响，硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO含量的变化，观察oxLDL对细胞及其功能的影响.结果：与对照组相比，oxLDL抑制EPCs增殖（B组0.189±0.007，C组0.112±0.008，D组0.070±0.008）（n=8)，促进EPCs的凋亡（B组18.35±0.08，C组24.22±0.07，D组40.37±0.13）（n=6），损伤细胞的分泌功能，作用随oxLDL浓度增
4、大而增强(P<0.001).结论：OxLDL抑制EPCs的增殖，损伤细胞分泌功能，促进细胞凋亡，与临床上观察到的冠心患者EPCs数量减少可能有一定的关系. 【关键词】内皮祖细胞；脂蛋白类，LDL；一氧化氮 0引言 成体动物及人的外周血、骨髓中存在有内皮前体细胞（EPCs），它们是以CD133,flk1,CD31,Ⅷ因子［1-2］为标志的一群细胞，可以迁移、增殖并分化为成熟的内皮细胞，促进内皮的修复及出生后新生血管化的形成［3］.新生血管化的形成可以改善心肌供血,并且阻止心肌梗塞区域疤痕组织的进一步形成［4］，从而改善心脏功能.大量
5、的研究已经证实，骨髓来源的EPCs有诱导缺血组织新生血管形成的潜力.相反,高脂血症损伤新生血管和供应缺血区组织血运的侧支血管的形成.氧化低密度脂蛋白(oxLDL)在动脉粥样硬化的形成过程中起着重要的作用，我们研究oxLDL是否影响内皮前体细胞的增殖、凋亡及细胞功能，从而间接了解oxLDL对新生血管化的形成有何影响. 1材料和方法 1.1材料雄性中国小型猪2只，体质量（40±5）kg，由我校实验动物中心提供；PBS,Ficoll淋巴细胞分离液，胎牛血清（Gibco，美国），DMEM（Gibco，美国），VEGF及bFGF（Australia
6、TBDScience，澳大利亚），10万U青霉素和100mg/L链霉素，小鼠flk1、山羊属CD133（SantaCruz，美国）、鼠CD31,FITC羊抗小鼠（IgG）、FITC羊抗兔（IgG）、罗丹明兔抗羊（IgG）（Zymed，美国），NO,TBA试剂盒（南京建成，中国），LDL（Sigma，美国），6孔培养板（Nunclon，丹麦）;EliteESP流式细胞仪(美国COULTER公司)，OlympusTokyoCK相差显微镜（奥林巴斯），DG3022A型酶联免疫检测仪（南京华东电子管厂），UV2450分光光度计（日本SHIMADZU公
7、司），MRC1024激光共聚焦显微镜（美国BioRad公司）. 1.2方法 1.2.1猪骨髓单核细胞的分离30g/L浓度苯巴比妥1mL/kg麻醉后，左侧髂后棘局部常规消毒铺巾，20g/L利多卡因5mL局麻，沿髂后棘行骨穿，有落空感后接肝素化的20mL注射器用力抽吸.抽出的细胞悬液经等体积DMEM混合重悬后，小心叠加于等体积淋巴细胞分离液上，保持界面清晰，2000r/min,离心20min，吸取中间云雾层细胞，5倍体积DMEM重悬，1500r/min,10min，洗涤两次.末次离心后，弃上清，加入含100mL/L胎牛血清的DMEM重悬.取微
8、量细胞悬液与等体积2g/L台盼蓝染液混合，进行细胞活力计数，死细胞被染成蓝色，活细胞不着色，活细胞数占98%以上.细胞接种于培养瓶中，由于成纤维细胞贴壁较快，多于2
