氧化型低密度脂蛋白对骨髓源性平滑肌样细胞粘附和迁移的影响

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1、氧化型低密度脂蛋白对骨髓源性平滑肌样细胞粘附和迁移的影响：严鹏科段才闻梅峥嵘司徒冰肖国宏【摘要】【目的】建立体外诱导骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞模型，探索骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞在动脉粥样硬化发生发展过程中的作用。【方法】采用贴壁法从SD大鼠骨髓中分离骨髓间质干细胞(BMSC)，运用条件培养基诱导BMSC分化成平滑肌细胞(SMC)，采用免疫荧光法分析骨髓间质干细胞及其分化后的细胞特异性标志物。羟脯氨酸测定法检测两种细胞合成细胞外基质能力，粘附和迁移实验检测两种细胞的粘附和迁移能力。【结果】①分离的BMSC呈长梭形，呈骨髓间质干细胞表型。经条件培养基诱导分化15d后，诱导分化的细胞形态呈

2、梭形平滑肌样。表达平滑肌细胞特异性蛋白标志物α-肌动蛋白(α-SMC)和平滑肌肌球蛋白重链1(SM-MHC1)，呈平滑肌细胞表型，命名为骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞(BMSC-SMC)。②羟脯氨酸测定结果显示，未处理BMSC-SMC合成较高量的胶原，其合成量低于VSMC的合成量，经80mg/Lox-LDL处理72h后，BMSC-SMC合成胶原的能力显著降低(P<0.01)。③细胞粘附实验结果发现，未处理BMSC-SMC有中等数量的细胞发生粘附，经80mg/Lox-LDL处理1h后，BMSC-SMC细胞粘附的数目少量增加，但两者比较差异无统计学意义(P>0.05);经80mg/Lo

3、x-LDL处理24h后，BMSC-SMC细胞迁移的数目显著增多，与未处理BMSC-SMC比较，差异具有统计学意义(P<0.01)。【结论】①经条件培养基诱导培养后，骨髓干细胞表达平滑肌特异性标志物，SMα-SMC和SM-MHC1，提示骨髓干细胞能成功分化成平滑肌细胞。②骨髓干细胞诱导成平滑肌细胞后，具有血管平滑肌细胞的一些生物学特征，如增殖能力和分泌胞外基质能力，同时保留了骨髓干细胞的一些生物学特征，如高迁移能力，为其在促动脉粥样硬化因素作用下，跨内皮细胞层和增殖的平滑肌细胞层迁移创造了有利的条件。【关键词】氧化型低密度脂蛋白;骨髓间质干细胞;诱导分化;血管平滑肌细胞　Abstract：

4、【Objective】Toestablishthemodelofsmoothmusclecelldifferentiatedfrombonemesenchymalstemcell(BMSC-SMC)invitroandinvestigatetherolesofBMSC-SMCintheoccurrenceanddevelopmentofartherosclerosis(As).【Methods】BMSCthefemoralboneofSDratsbyadherentmethod，andVSMCfromthoracicaorta.BMSC-SMCBMSCbyspecialconditionmed

5、ium.ThespecificmarkersofBMSCandsmoothmusclecelldifferentiatedfrombonemesenchymalstemcell(BMSC-SMC)munofluorescence(IF)staining.Aftertreatedg/Lox-LDLfor72h，hydroxyprolineassayedtodetecttheextracellularmatrixsynthesiscapacity，andadhesionandmigrationexperimentsigratorycapacityofBMSC-SMCandVSMC.【Results

6、】①TheisolatedBMSCpresentaslim-spindleappearance.Thecells(BMSC-SMC)inducedbyconditionmediumcontainingb-FGFandTGF-βfor中膜血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMC)迁移到内皮下层并异常增殖或凋亡是动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)形成的重要步骤，近年的研究发现[1]骨髓干细胞分化而来的平滑肌细胞参与动脉粥样硬化的发生和发展，但骨髓干细胞(bonemesenchymalstemcell，BMSC)分化而来的平滑肌细胞在新生血管内膜

7、中究竟是修复血管，还是促进了动脉粥样硬化的发生，迄今为止，尚不清楚。本研究在体外诱导骨髓干细胞分化为平滑肌细胞简称骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞(smoothmusclecelldifferentiatedfrombonemesenchymalstemcell，BMSC-SMC)，并通过羟脯氨酸测定法检测细胞合成细胞外基质能力，粘附和迁移实验检测细胞的粘附和迁移能力，探讨BMSC-SMC在动脉粥样