酿酒酵母耐乙醇特性的分析及代谢工程改造的研究（可编辑）

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1、酿酒酵母耐乙醇特性的分析及代谢工程改造的研究山东大学博士学位论文分类号:单位代码:密级:学号:■■『厶茹只孥■■■■博士学位论文▲■论文题目:酿酒酵母耐乙醇特性的分析及代谢工程改造研究:●■■一’▲■■■日臣■‘一●●●一’爹作者姓名高翠娟专业发酵工程指导教师姓名专业技术职务祁庆生教授年月日山东大学博士学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,

2、均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。日期:论文作者签名:蔓錾里刍翌臣』:签关于学位论文使用授权的声明本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定期:型业论文作者签名:虚粗导师签名牡日山东大学博士学位论文目录摘要?..?.缩略词表第一章绪论?.酿酒酵母介绍..酿酒酵母作为模式生物的作用..酿酒酵母在乙醇发酵的应

3、用..乙醇压力对细胞的效应..乙醇对酵母的影响?..压力响应的过程机制...压力响应信号传导....压力响应基因表达变化?.....压力适应?..酵母细胞转录调控机制??...转录前的准备??染色质的重建?..转录调节...顺式作用元件?一...通用转录因子...转录调节因子..其他调节?...高通量差异基因表达研究方法?...差异基因表达谱分析??。...微阵列技术....基因表达系列分析?..蛋白组学分析??...代谢工程改造方法介绍?...理性代谢工程??....反向代谢工程..随机改造工程??~..全转录工程机制.

4、..丌及编码蛋白介绍.本论文的工作内容.第二章在酿酒酵母.中的应用研究.实验原理??..实验材料与方法?....实验材料?.....菌株和质粒...培养基..分子生物学常用工具酶?....常用试剂盒....主要试剂?....聚合酶链式反应用试剂..山东大学博士学位论文..仪器和设备?..分子生物学常用溶液及缓冲液配制??。...琼脂糖凝胶电泳所用试剂...碱裂解法质粒提取试剂...酵母基因组快速提取试剂...酿酒酵母电转化试剂..实验方法?.....菌种保存方法...细胞活化?...分子生物学常规操作...大肠杆菌质粒的快

5、速提取...酵母基因组的快速提取?...引物设计...反应体系...反应程序...双酶切反应体系?...目的基因和载体连接反应??....大肠杆菌感受态细胞的制备?。...连接产物的大肠杆菌转化??....阳性克隆的筛选与测序....酵母感受态细胞的制备....酵母细胞的电转化方法....细胞生长表型分析?.实验结果?...模板的准备??酿酒酵母.基因组与质粒的提取..点突变等位基因..重组质粒.和的构建..生长表型比较??。.√讨论??.:;.本章小结?.第三章酿酒酵母.耐乙醇的定向驯化?.实验流程?..实验材料与方法?

6、一..菌株和培养基..实验方法?.....细胞活化?...定向哥化?...细胞生长比较...细胞耐受醇击和热击能力比较?..表达谱分析?...细胞制备?....的提取及样品制备?...数据分析?.实验结果?一山东大学博士学位论文..定向驯化实验??....驯化前后菌体生长比较?....驯化前后细胞的耐醇和热击能力比较?....表达谱分析.....差异表达基因的聚类分析和分析....差异基因比较分析.讨论??..本章小结?.第四章改造啤酒酵母的分子构建及表型分析研究.实...实验流程?...实验材料?...菌株和质粒....

7、培养基??...实验方法?....目的基因的扩增?.....引物设计表....反应体系...反应程序..单酶切验证反应??”..目的基因和载体连接反应..酿酒酵母的电转化。..二倍体啤酒酵母的分子改造??....基因组上一个拷贝的敲除...质粒/的构建及电转化...重组酶的诱导及基因丢失...质粒/丢失?...重组菌的构建?....的基因组整合....质粒/的电转化...酶的诱导...质粒丢失?..细胞表型生长比较。.结果与讨论...酿酒酵母基因组上单拷贝敲除?....敲除元件的获得......敲除元件的电转化...质粒/

8、的构建及电转化...重组酶的诱导及基因丢失...质粒/的丢失...重组菌的构建?...点突变等位基因.......基因组整合元件的获得.....电转化及重组菌构建..山东大学博士学位论文..细胞表型检测??。.本章小结?..第五章啤酒酵母?突变株的发酵研究一.实验材料?。..实验菌株?。..培养基??。