大量制备重组尿酸酶工艺条件的研究-食品与生物技术学报

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1、审稿意见：1、摘要中有大量错误，建议重写。注意语言表达要规范，句子要正确断句等问题。如“利用重组质粒PET-UrateOxidase表达转化E.coliJM109（DE3）构建的尿酸酶基因工程菌进行大规模发酵培养并对重组尿酸酶进行分离纯化。”—注，结论中也有相同的错误。“种子培养基斜面”“挑取单菌落于试管液体培养基中培养后将上述菌液接种于摇瓶中继续培养后即为培养用工程菌种子液”“成功实现了工程菌的高密度发酵培养；经分离纯化后获得该酶的纯化倍数达4.5倍”回答：谢谢审稿人的意见，摘要部分已经重写。结论中相同的错误也已经全部修改，详见正文中黄色修改的部分。2、1.2中“种子培养基（LB培养基）（

2、g/L）组成”改成“种子培养基（LB培养基）（g/L）”，删除后续成分中出现的g；发酵培养基也要这样改。回答：谢谢审稿人意见，在以后写作中一定注意此类正式的表达形式。文中黄色为修改的部分。3、1.4中“试管液体种子培养基”表达不准确，请修改。回答：谢谢审稿人，已做修改。4、1.5中“通气量0.03Pa，温度37℃间隔2小时定时取样”，中通气量是否正确？温度后面加“，”。回答：这里确为粗心导致的写作错误，应改为“通气量调节至使溶解氧大于30%饱和度”，谢谢审稿人的细心。5、1.9中“加入硫酸铵达40%饱和度”表达不准确，请修改。回答：已在文中做了修改“在电动搅拌下加入硫酸铵，至饱和度达40%”

3、，谢谢审稿人。6、1.10中“用部分收集器收集，通过酶活力检测结合紫外检测仪合并收集酶活性峰部分，”，表达不规范，请修改。回答：已在相应位置修改为“通过酶活性检测方法及紫外检测280nm吸收峰情况用部分收集器收集活性峰部分”，谢谢审稿人意见。7、2.1中“工程菌发酵罐生长曲线”表达不准确，请修改。回答：已修改为“工程菌发酵罐菌体生长曲线”，谢谢审稿人。8、2.3中“经SDS-PAGE（图4）和HPLC（图5）均显示单一蛋白着色带和单一洗脱峰”，改成“经---检测，结果显示---”。回答：谢谢审稿人，已在文中相应位置处做修改。以后一定注意多收集此类正确的表述方式。9、结论中“乳糖作为一种廉价的

4、二塘”改成“乳糖作为一种廉价的二糖”回答：谢谢审稿人的细心，已做修改。10“它可以诱导携带pET表达质粒的E.coliJM109（DE3）的lac启动子表达T7mRNA聚合酶，再由T7mRNA聚合酶诱导pET载体上的T7启动子表达目的蛋白，”，这句话请重写。回答：谢谢审稿人，已修改为“乳糖作为一种廉价的二糖，它可以使携带pET表达质粒的E.coliJM109（DE3）的lac启动子表达T7mRNA聚合酶，利用该酶诱导表达目的蛋白”。11、本文章，菌体OD600最高不超过15，不能称为“高密度发酵”。回答：谢谢审稿人的宝贵意见，在阅读了相关的文献后确实不应该称为高密度发酵。本文的重点在于乳糖诱

5、导发酵条件的优化及重组尿酸酶的分离纯化，所以特此将题目修改为“重组尿酸酶发酵培养及制备工艺条件的研究”。文中的相应部分也同样做了修改。12、菌种英文名称要缩写。回答：已做修改，谢谢审稿人。此外，文中还要很多不规范的地方，请仔细修改。回答：再次通读了全文，不当的地方已做了修改，请审稿人审阅。编辑意见：文后参考文献列表中的中文期刊文献需补英文对照。回答：已做修改，请编辑查阅。重组尿酸酶发酵培养及制备工艺条件的研究赵明1何中杰1王瑞1姚明东1师慧2王振伟2孟尧1（610500成都,成都医学院检验医学院1610064成都,四川大学生命科学学院/生物资源与生态环境教育部重点实验室2）[摘要]目的利用含

6、PET-UrateOxidase表达质粒的重组E.coliJM109（DE3）菌株进行大规模发酵培养，拟建立一种高效、低成本的生产重组尿酸酶的技术工艺路线。方法取冻存的工程菌接种于含1%琼脂的种子培养基中进行培养，从划线平板上挑取单菌落接种于摇瓶中继续培养，最后以5%接种量接种于发酵培养基中绘制生长曲线；以乳糖作为诱导剂与传统IPTG诱导方法进行发酵培养比较；菌体经高压均质机破碎、40%-60%硫酸铵分级沉淀和Q-SepharoseF.F.层析进行分离纯化。结果乳糖作为诱导剂在300升发酵罐中进行培养可获得菌体湿重2,700g，目的蛋白表达量占菌体可溶性蛋白的30%左右，略高于IPTG诱导的

7、效果；经分离纯化后该酶的纯化倍数可达原来的4.5倍，活性回收率为40%；纯化的重组尿酸酶经SDS-PAGE和HPLC分析显示单一蛋白着色带和单一洗脱峰。结论本文所取得的研究成果为该酶的医学实际应用奠定了一定的理论实验基础。[关键词]重组尿酸酶；乳糖；诱导表达；发酵；纯化[中图法分类号]Q55[文献标志码]AThestudyonfermentationandpreparationofrecombinanturi