肺癌肝癌转移相关基因的技术研究方案

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1、肺癌是一种常见的恶性肿瘤，根据WHO在2013年12月发表的全球肿瘤数据统计，2012年全球新发病例中有180万（13.0%）是肺癌患者，有160万人（19.4%）死于肺癌，居全球新发病例及死亡病例的首位[1]。同时据《2012中国肿瘤登记年报》报道，2012年肺癌仍居我国恶性肿瘤发病率及死亡率之首，5年的存活率小于15%[2-4]，而侵袭转移和耐药是肺癌患者治疗失败的主要原因。上皮间质转化（Epithelial–MesenchymalTransition,EMT）是肿瘤发展中的决定性过程，原发肿瘤

2、的上皮细胞转化成间质细胞，从而获得运动的能力，脱离原发部位并侵袭周围组织进入血液循环，在远隔部位通过间质上皮转化（Mesenchymal-Epithelialtransition,MET）形成新的转移灶[5-7]。近年来研究发现，在肺癌的侵袭和转移过程中，均有EMT的发生[8]。EMT通过改变肿瘤细胞的特性及肿瘤细胞生存的微环境来不断增强肿瘤的侵袭性与转移性，在肿瘤侵袭中起重要作用，而且肿瘤细胞的EMT程度直接决定了肿瘤的恶性程度。同时，越来越多的研究表明EMT在肺癌的耐药中起到关键作用，EMT通过

3、对多种信号通路的调控使得肺癌细胞对抗肿瘤药物的敏感性降低，产生耐药性[9]。鉴于在肺癌的侵袭转移以及耐药的形成中，EMT起到的重要作用，加深加快对EMT与肿瘤转移及耐药相关机制的研究具有重大意义。EPSTI1（EpithelialStromalInteraction1）是一个新发现的在EMT中起关键作用的基因。2002年，OleW.Petersen实验室在与人乳腺肌纤维母细胞共培养的非转移性乳腺癌细胞系MCF-7中发现了该基因的诱导表达[10]。有研究认为EPSTI1的表达是由于在共培养系统中肌纤维

4、母细胞分泌出α干扰素，从而刺激MCF-7细胞表达EPSTI1，随后，EPSTI1也被证实是一种干扰素应答基因[11-13]。目前对于EPSTI1的功能性研究主要集中在乳腺癌中。研究发现，EPSTI1在正常乳腺组织中无表达或低表达，而在乳腺癌肿瘤组织中超表达[10,12]。MCF-7细胞在α干扰素的刺激下，能够高表达EPSTI1，EPSTI1的表达能够上调EMT标志基因Twist、Slug、Fibronectin以及α2β1整联蛋白的表达[12]。同时，临床研究证实EPSTI1高表达病人的成活率要远远

5、低于EPSTI1低表达病人[12,13]。2013年10月在Oncogene上发表的文章（申请者为第三作者）还证实了EPSTI1在乳腺癌细胞中直接受到转录因子KLF8（Krüppel-likefactor8）的调控。KLF8在多种癌细胞中超表达，其表达在细胞增殖、致癌转化、EMT、肿瘤浸润及转移中也起着重要作用[14,15]。EPSTI1在非转移性乳腺癌细胞MCF-7中的超表达能够使细胞具有锚着非依赖性生长特性并提高细胞迁移及入侵的能力，并且能够在小鼠体内促进乳腺癌的原位浸润及肺部转移。同时，在正常

6、细胞中过表达EPSTI1，同样能够增强其侵袭的能力[15]。现有的研究均验证了EPSTI1的表达对EMT的促进作用[12,16,17]，而EPSTI1也成为了一个新发现的EMT重要调节因子。因此，对该基因更深入细致的研究，能够帮助我们进一步了解EMT的分子机理及肿瘤浸润、转移的机制，也为癌症的诊断（肿瘤标记物）及预后提供了新的思路。目前尚未见到EPSTI1在肺癌细胞中的研究报道。而根据TheHumanProteinAtlas的调查数据显示（图1），EPSTI1在肺癌组织中高表达，而在正常组织中表达量

7、很低，该数据与EPSTI1基因在乳腺癌组织中的表达情况相似，提示该基因也可能在肺癌发生中起到重要作用，为我们的项目提供了前期数据支持。图1.免疫组化结果显示EPSTI1在肺癌及肺正常组织中的表达注：EPSTI1在肺正常组织中低表达（A,B），而在肺癌组织中高表达(C,D)。（结果来自http://www.proteinatlas.org/ENSG00000133106/）本课题将从细胞、实验动物两个层面研究EPSTI1基因与肺癌EMT及转移的相关性，揭示EPSTI1的肿瘤促进作用。本研究将为下一步开

8、展EPSTI1基因在肺癌EMT及转移的分子机理研究提供数据支撑，同时也能为肺癌的预后及治疗提供新的思路。参考文献1.Terrasse,V.,LatestworldcancerstatisticsGlobalcancerburdenrisesto14.1millionnewcasesin2012.TheInternationalAgencyforResearchonCancer(IARC):Lyon/Geneva.2013.2.Yang,P.,Epidemiologyo