肝癌相关基因的筛选及功能研究

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1、上海交通大学硕士学位论文肝癌相关基因的筛选及功能研究姓名：滕小梅申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：韩泽广20080501上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。（请

2、在以上方框内打“7”）学位论文作者签名:指导教师签名:日期:日期:上海交通大学医学院硕士学位论文肝癌相关基因的筛选及功能研究摘要我们前期利用去甲基化药物处理15株肝癌细胞株，结合基因芯片技术分析药物处理前后基因表达谱的变化，候选到一个新的功能未知基因SCARA5基因。通过RT-PCR,DNA测序、FISH、甲基化检测等分子生物学技术，研究了该基因在肝癌组织中的表达及其分子生物学机制。我们发现SCARA5基因在72.5%(29/40)的肝癌样本中表达明显降低。进一步研究发现，在40对肝癌样本中，有14

3、(35%)对样本表现岀至少一个微卫星位点缺失。在14对SCARA5基因明显下调的肝癌样本中，7对样本中该基因启动子区域的甲基化水平明显升高(pvO.Ol)o我们当前的结果提示：SCARA5可能是一个新的肝癌相关的抑癌基因，其在肝癌的表达下调与染色体杂合子缺失以及启动子区域的异常高甲基化有密切的关系。我们利用前期的肝癌基因表达谱数据(基因芯片)，发现PNMA5基因在肝癌组织中高表达。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，检测PNMA5在人类正常组织以及肝癌组织和癌旁组织中的表达水平，结果显示在1

4、5种人类正常组织中，PNMA5仅在睾丸、卵巢和脑组织中高表达。PNMA5基因在41.7%(5/12)的肝癌组织中有明显的上调。利用RNA干扰技术沉默肝癌细胞株Focus和PLC中内源性PNMA5基因表达后，两种肝癌细胞的生长均受到明显的抑制(pvO.Ol),同时，从G1期进入S期细胞明显减少(p<0.01)o提ZNPNMA5可能是一个新的肿瘤-睾丸相关基因。关键词肝癌，抑癌基因，SCARA5,PNMA5,RNA干扰上海交通大学医学院硕士学位论文SCREENINGANDFUNCTIONSTUDYOFH

5、EPATOCELLpLARCARCINOMARELATEDGENESABSTRACTInthepresentstudy,weapplied15HCCcelllinestreatedwith5-aza-2!-deoxycytidineandtrichostatinAforDNAmicroarray.Wedisclosed,SCARA5,anovelputativetumorsuppressorgenebyanalysisofgenesexpressionprofilewhencomparedwithc

6、ellstreatedwith5-aza-2f-deoxycytidineandtrichostatinA.ThroughRT-PCR,DNAsequencing,FISHandbisulphate-treatedDNAsequencingassays,weresearchedtheexpressionandthemoleculemechanismofSCARA5geneinHCC.SCARA5genewassignificantlydown-regulatedin72.5%(29/40)HCCsp

7、ecimensascomparedtoadjacentnon-cancerousliversatmRNAlevel.Furthermore,14outof40caseswereconsideredasinvolvinginLOHatleast1themicrosatellitemarker.7outof14caseswithdown-regulationofSCARA5expressionshowedthehypermethylationofSCARA5promoter(p<0.01).Ourres

8、ultsshowedLOHatSCARA5locusandthehypermethylationofSCARA5promoterwereassociatedwiththedown-regulationofSCARA5expressioninprimaryHCC・InourprevioustranscriptomicdataonHCC,weinvestigatedPNMA5genewassignificantlyup-regulatedin41.7%(5/12)HCCs