21抑制剂联合伊马替尼对慢性粒系白血病k562细胞增殖的作

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1、MicroRNA-21抑制剂联合伊马替尼对慢性粒系白血病K562细胞增殖的作用赵广富1，朱贵华1，苏林2（1.连云港市第二人民医院，江苏连云港222023；2.中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所，北京100005）摘要：目的探讨microRNA-21基因拮抗联合酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞的增殖及周期的调控作用。方法在293TN细胞中包装并收获可以抑制内源microRNA-21表达的重组慢病毒颗粒，进行病毒滴度测定后，感染K562，经流式分选得到GFP阳性的K562细胞株。Northernblot证实感染后micro

2、RNA-21的表达，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期。结果Northernblot证实K562细胞中microRNA-21的表达水平与正常人外周血细胞相比明显升高。抑制microRNA-21表达的K562细胞株生长速度明显减慢，细胞周期运行也受到阻滞；伊马替尼作用于microRNA-21表达抑制的K562细胞后，细胞增殖与伊马替尼单独作用的K562细胞及单独抑制microRNA-21表达的K562细胞相比均明显降低，周期也受到更严重的阻抑。结论在K562细胞中联合使用拮抗microRNA-21表达和酪氨酸抑制剂伊马替尼能够协同抑制细胞增殖及细

3、胞周期运行。关键词：microRNA-21;伊马替尼;K562;EffectofmicorRNA-21inhibitorcombinedwithimatinibonchronicmyeloidleukemiaK562cellgrowthZHAOGuang-fu1,ZHUGui-hua1,SULin2(1.LianyungangSecondPeople’sHospital,LianyungangJiangsu222023;2.ChineseAcademyofMedicalSciences(CAMS)&PekingUnionMedicalCollege(PUM

4、C),Beijing100005)Abstract：ObjectiveTostudytherolesofmicroRNA-21incooperationwithimatinibinachronicmyeloidleukemiacelllineK562.MethodsTherecombinantlentivirusparticles(pMIRZip-miR-21andcontrolpMIRZipvector)wereharvestedfrom293TNcellsandaddedtothemediumwithculturedK562cells.K562cell

5、sexpressingGFPwereselectedbyflowcytometry.TheexpressionofmicroRNA-21wasdetectablebyNorthernblot.ThecellproliferationwastestedbyMTT,andthecellcyclewasmeasuredbyflowcytometry.ResultsMicorRNA-21wassignificantlyup-regulatedinK562cellscomparedwithperipheralbloodcellsfromnormal.Inhibiti

6、onofmicorRNA-21inK562cellsdecreasedcellproliferationandcellcycleprogression.ThegrowthofK562cellstranducedwithLenti-miR-21wasmarkedlyinhibitedafterimatinibtreatment.Moreover,ThepercentageofcellsatG0/G1phasegreatlyincreasedaftertransductionwithLenti-miR-21toK562combinedwithimatini.C

7、onclusionTheinhibitionofmicorRNA-21incombinationwithimatinibhasasynergisticeffectontheproliferationandcellcycleprogressionofK562cells.Keywords:microRNA-21;imatinib;k562;micorRNA（小RNA）是近年来新发现的一类调节分子，它通常通过与靶mRNA分子互补结合使mRNA的翻译受阻或使靶mRNA降解而抑制其表达[1]。microRNA所介导的转录后调控已经成为公认的真核生物基因表达调控网络的

8、重要组成结构，并与转录因子、表观遗传调控因子等协同作用共同完成复杂