sti571诱导k562细胞耐药前后基因差异表达的研究

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1、STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达的研究山东医药2007年第47卷第l期STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达的研究樊伟,刘晓力丛,张嵩,杜庆锋,姚锋,王瑜,周淑芸(1济南军区青岛第二疗养院,山东青岛266071;2南方医科大学南方医院)[摘要]目的研究STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达情况,探讨其耐药机制方法用药物浓度逐步递增的方法诱导野生型K562细胞(K562一w)对STI571产生耐药,用台盼蓝染色,MTT法对耐药K562细胞(K562一R)进行特性鉴定.应用DNA芯片技术对STI571耐药前后的

2、K562细胞的基因差异表达进行检测.结果诱导出K562一R-的耐药浓度为0.5/~mol/L,活细胞比例为98.5%.芯片结果发现662个基因出现差异表达.其中335个基因表达上调,327个基因表达下调.结论利用DNA芯片技术挑选与耐药可能相关的基因,可为ST1571耐药机制的研究提供新的切入点.[关键词]STI571;抗药性;K562细胞;基因芯片;基因表达谱[中图分类号]R733.7[文献标识码]A[文章编号]1002—266X(2OO7)Ol一0017—02ComparativegeneexpressionprofileofK562ce

3、llsresistanceinducedbySTI571FANWei,LXiao—li,ZHANGSong,DUQng—feng,YAOFeng,WANGYu,ZHOUShu-yun(1QingdaoSecondarySanatoriumofJinanCommand,Qingdao266071.尸.尺.China)Abstract:[Objective]TostudythedifferentgeneexpressionprofileofK562cellsresistancetOST1571andtOinvestigatethepotentia

4、lmechanismofacquiredresistance.[Methods]Thewild—typeK562cellswereculturedingraduallyincreasedconcentrationsofSTI571.TrypanbluedyeandMTTassaywereappliedtOanalysesthecharacteristicsoftheresistantK562cells(K562一R).ThegeneexpressiondifferencebetweenK562一RandK562一Wwasexaminedwit

5、hcDNAarray.[Results~ThesurvivalpercentageofK562一Rwas98.5byTrypanbluedyeandMTTassayconfirmedK562一Rcanlivesteadilyat0.5~tmol/LSTI571.Wedetecteddifferentexpressionof662genesinwhich335geneswereup—regulatedand327genesweredown—regulated.[Conclusion]ToidentifiedgenesrelatedtOSTI57

6、1resistancewithcDNAarraywouldprovideawayonthepotentialmechanismofST1571resistance.Keywords:STI571;drugresistance;K562cells;cDNAarray;geneexpressionprofilingsTI571又名格列卫或伊马替尼,它能竞争性地阻断ATP在Abl酪氨酸激酶上的结合,有效抑制Bcr/Abl融合基因阳性细胞异常增高的酪氨酸激酶活性,从而导致这类细胞增殖受阻,凋亡增加n].该药用于临床取得了令人鼓舞的血液学和遗传学缓解率

7、,但也随之出现耐药现象.2003年1月_~2004年12月,我们用基因芯片技术分析STI571耐药细胞系差异基因表达,为进一步探讨STI571耐药提供实验依据.1材料与方法1.1药物及试剂STI571为Novartis公司产品,胎牛血清购于杭州四季青公司,RPMI1640粉购于[基金项目]国家自然科学基金(30271463);广东省自然科学基金(020086).△通讯作者GIBCO公司,MTT购于Duchefa公司,BioStarH40S表达谱芯片为上海博星公司产品.1.2K562耐药细胞(K562一R)的诱导Bcr/Abl(+)的野生型K5

8、62(K562一w)细胞为实验室常规培养,待其处于指数增长期,按细胞浓度2×10/ml～5×10/ml,STI571初浓度0.05~mol/I进行诱导培养.根据细胞