病原体诱导前后家蝇幼虫差异基因的表达及表达产物活性研究

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1、分类号：S859.7单位代码：10193密级：无学号：2012601硕士学位论文病原体诱导前后家蝇幼虫差异基因的表达及表达产物活性研究TheexpressionandactivityofdifferentexpressedgenesofMuscadomesticalarvaebeforeandafterstimulatedwithpathogens作者姓名：邵清学位类别：农学硕士专业名称：基础兽医学研究方向：动物药理与毒理指导教师：马红霞教授所在学院：动物科学技术学院2015年5月项目来源国家自然科学基金资助项目（No.31140026;30940055）Granted

2、byNationalNatureFund（No.31140026;30940055）吉林省世行贷款农产品质量安全项目（No.2011-Y05）ProjectFundonagriculturalproductsqualityandsafetyfromWorldBankLoanofJilinProvince（No.2011-Y05）教育部新世纪优秀人才计划项目（No.CET-10-0174）NewCenturyExcellentTalentsProjectFundofeducationministryin2010（No.CET-10-0174）吉林省科技发展计划项目（No.

3、20111820;20120229）ScienceandTechnologyDevelopmentProjectFundofJilinProvince（No.20111820;20120229）独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切

4、相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成

5、的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日导师签名：签字日期：年月日摘要家蝇幼虫长期生活在潮湿、富含有机质的环境中，常携带大量的病原体和有害因子，但本身却很少发病。据研究人员预测，家蝇幼虫独特的免疫防御能力源于其体内产生的抗病活性物质。这些抗病活性物质不仅具有广谱抗菌能力，还有抗真菌、原生动物、病毒乃至杀死癌细胞而不破坏体内正常细胞作用的功能，已成为国内外学者关注的焦点。在病原体的诱导刺激下家蝇幼虫可通过基因对其免疫反应进行调控，合成多种增量表达的抗病活性物质，如抗菌肽、凝集素、溶菌酶、幼虫体外分泌物、几丁质、壳聚糖以

6、及一些未知的活性物质等。这些抗病活性物质的发现使研发新型药物代替抗生素进而缓解病原体耐药压力成为可能。本研究分别选取牛多杀性巴氏杆菌、猪肺炎支原体及鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫前、后的三个差异基因为研究对象，进行其克隆、表达及表达产物活性研究。应用RACE技术（RapidamplificationofcDNAends，RACE）以3'和5'-RACEReadycDNA为模板克隆牛多杀性巴氏杆菌诱导前后构建的抑制性消减文库（SSH文库）中的一个家蝇幼虫未知功能基因MdU-F501（Muscadomesticauncharacterized-F501）全长序列，测序分析后应

7、用生物信息学软件对MdU-F501的ORF（openreadingframe）序列进行分析并预测其功能，并进一步将克隆获得的MdU-F501全长序列与原核表达载体pGEX-4T-1连接，构建重组表达质粒MdU-F501-pGEX-4T-1；将猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫前后构建的SSH文库中的一个家蝇幼虫未知功能基因MdU-132（Muscadomesticauncharacterized-132）全长序列和鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫前后构建的SSH文库中的家蝇幼虫溶菌酶II基因MdL-II（Muscadomesticalysozyme-I