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1、siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用第42卷第3期2OO6年9月青岛大学医学院ACTAACADEMIAEMEDICINAEQINGDAOUNIVERSITATISVo1.42,No.3September2006siRNA对胃腺癌细胞株SGC一7901血管内皮生长因子基因表达的作用徐文华,葛银林(青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室.山东青岛266021)[摘要]目的研究siRNA对人胃腺癌细胞株sGc一79O1血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响.方法利用体外合成带有T7启动子的VEGF基因I)NA片段,
2、转录针对VEGFmRNA的siRNA.通过脂质体2000将合成的siRNA转染入sGC一79O1细胞,设置转染VEGF错义序列组,脂质体组,空白对照组作为对照.用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT—PCR检测转染后VEGFmRNA表达水平的变化.ElISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化.结果所设计的两个靶位点siRNA均能有效抑制胃腺癌细胞的生长,并使细胞周期阻滞于G,/G期;VEGFmRNA的表达也受到有效抑制,明显减少;同时,对应的VEGF蛋白水平也显着降低,作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有出现这种变
3、化.结论体外转录合成的siRNA可抑制胃腺癌SGC一7901细胞VEGF基因的表达.[关键词]RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达[中图分类号]R735.2[文献标识码]A[文章编号]1672—4488(2006)03—022204THEEFFECTOFsiRNAONTHEEXPRESSIONOFHUMANGASTRICCANCERCELLLIESGC-7901XUWE—HUA,GEY1NllNtDepartmentofBiochemistryandMolecularBiology.QingdaoUniversityMedicalCol
4、lege.Qingdao266021.China)ABSTRACT]ObjectiveToevaluatethegeneexpressionofVEGFbyRNAinterferenceinhumangastriccancer.MethodssiRNAstargetingVEGFmRNAwas,obtainedbyinvitrotranscription.whichwastransfectedintohumangastriccancerceillinesSGC7901withLipofectamine2000.Thenontransfectedce
5、lls.cellstrealedwith1ipofectimineandcellstrearedwithSCRweretakenascontrois.MTTwasusedtodetecttheinhibitiverateofcellgrowth.Flowcytometrywasusedtodetectthechangesofcyc—lingofthecel1.TheinhibitiveeffectofsiRNAonmRNAlevelwasdetectedbyRTtCR,thesecretionofVEGFproteininthesu—pernata
6、ntbyE1ISA.ResultsThesmallinterferingRNA(siRNA)targetinghumanVEGFeffectivelyinhibitedtheproliferationofgastriccancerSGC一7901.Itaffectedthedistributionofcellcycle,increasedceilpopulationinGl1/'GIphaseanddecreaseditinSphase.TheexpressionofVEGFmRNAwassignificandyinhibitedinSGC7901
7、;otherwise.VEGFproteinnotablydecreased,buttheeffectsdidnotappearincontrolscramblesiRNA.ConclusionThelevelofVEGFgeneexpressionofSGC～7901cellscanbedeclinedbytransfectedwithsiRNA.[KEYWORDS]RNAinterference;gastricneoplasms;vascularendothelialgrowthfactor;geneexpression肿瘤血管的形成受多种因子
8、的调节,其中血管内皮生长因子(VEGF)是作用最强,特异性最高的一种能刺激细胞运动和肿瘤血管生成的因子,与肿瘤的发生,发展
