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1、食管癌组织中血管内皮生长因子的表达对树突状细胞的影响 [Abstract]AIM:Toinvestigatetherelationshipbetortissue.METHODS:VEGFandS100proteinin94patientsamunohistochemicalmethod.RESULTS:PostiverateofVEGFinesophagealtumortissuesoreVEGFberofS100+DCsexisted(r=-0.763,-0.908,respectively;P<0.05).Furthermore,thereaybeare
2、verserelationshipbetortissue,VEGFcoulddecreasethenumberofS100+DCandimpairtheimmunologicalfunctionofthebody. [Keya;vascularendothelialgroAb）、LSAB免疫组化染色法检测试剂盒、DAB显色试剂盒及羊抗兔lgG,均为武汉博士德生物工程有限公司产品。 1.3方法VEGF和S100蛋白的检测均按LSAB试剂盒中的说明进行。将94例食管癌组织经40g/L的多聚甲醛固定、石蜡包埋及连续切片（片厚4μm）后,加3mL/LH2O2甲醇溶液于
3、室温温育10min以灭活内源性过氧化酶的活性。然后滴加10g/L胰蛋白酶及100mL/L山羊血清封闭特异性位点。依次滴加抗VEGF多克隆抗体、抗S100蛋白mAb（37℃温育1h或4℃冰箱过夜）、1∶200生物素化的山羊抗兔lgG（37℃温育1h）及HRP标记的亲合素（37℃温育1h）。加DAB显色后,经逐级酒精脱水、二甲苯透明及中性树胶封片,观察结果。免疫组化LSAB法检测癌组织内VEGF的表达,参照Inoue等[1]报道的免疫组化染色法及结果判定标准,以同一切片中的平滑肌细胞为阳性对照（内对照）。肿瘤细胞染色的强度等于或低于平滑肌细胞者为阴性,高于平滑肌细胞者为
4、阳性。再根据×400视野中连续计数200个肿瘤细胞中阳性肿瘤细胞的比例,将VEGF表达的水平再分为3个级别:肿瘤细胞与平滑肌细胞的染色强度≤30%者为1+;≤70%者为2+;>70%者为3+。再分别计数5个高倍镜视野中阳性细胞的数目,取其均值作为阳性细胞分布的密度。S100蛋白的表达以分散地存在于肿瘤细胞之间的细胞质染呈棕黄色的细胞为阳性[2]。并随机在癌周及癌间质区中DC的密集区,于高倍镜下计数5个视野中的S100+DC,取其均值作为癌组织中S100+DC的密度。<6个者为1+,7～15个者为2+,16个以上者为3+。 1.4统计学分析等级资料相关分
5、析用秩相关分析法进行,P<0.05表示具有统计学差异。 2结果 免疫组化染色显示,VEGF表达阳性者在肿瘤细胞的细胞质中染呈棕黄色或棕褐色。94例肿瘤组织切片中,VEGF表达阳性者70例(阳性率为74.46%),其中,1+者18例,2+者30例,3+者22例。VEGF的表达与患者的临床分期及癌组织的分化呈正相关（r=0.864,0.803）,即临床分期越晚,癌组织的病理分化越低,癌组织中VEGF的表达越显著（P<0.05,表1,图1）。食管癌组织中DC上S100蛋白的表达:1+者36例,2+者28例,3+者30例。临床分期越晚及癌组织的分化程度越低者
6、,癌组织中S100+DC的数量越少,即癌组织中S100+DC的密度与患者的临床分期及癌组织的分化程度呈负相关（r=-0.763,-0.908,P<0.05,表1,图2）。食管癌组织中S100+DC的密度与VEGF的表达呈负相关,即VEGF表达量上升者,S100+DC的密度降低（r=-0.817,P<0.05,表2）。 表1食管癌组织中VEGF、S100+DC的表达与患者临床分期及病理分化的相关性 略 图1食管癌组织内VEGF的表达 略 表2食管癌组织中VEGF的表达与DC密度的相关性 略 图2食管癌组织内S100+DC的表达 略 3讨论 VE
7、GF是一种二聚体糖蛋白,能特异性地引起血管内皮细胞增殖并诱导血管生成。其在乳腺癌和肝癌等组织中呈高表达,通过诱导肿瘤血管的形成,在原位肿瘤的形成、生长以及转移过程中起着重要作用。徐卫国等[3]报道,食管癌细胞中VEGF的表达率为63.4%,表达率高者,患者的预后明显不良。本研究表明,食管癌组织中VEGF的表达率为74.46%,且与肿瘤患者的临床分期呈正相关,与Noguchi等[4]的报道类似。DC是目前已知的机体内功能最强的抗原提呈细胞,能激活静息期T细胞,促进T辅助细胞和细胞毒性T细胞(CTL)的生成,在诱导抗肿瘤反应中起重要的作用[5]。Ishigami等[
