丹参酮iia对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

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1、丹参酮IIA对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响：符寒，和水祥，徐俊丽，赵刚，王艳丽，任牡丹【摘要】目的观察丹参酮IIA对人肝癌SMMC7721细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用，及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响，探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法体外培养人肝癌SMMC7721细胞株，MTT比色法观察细胞增殖抑制情况；荧光显微镜检测细胞凋亡；免疫细胞化学法和ELISA法分别检测细胞及细胞培养液中VEGF的表达情况。结果丹参酮IIA对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用，并呈剂量依赖性，以0.5mg/L终质量浓度的抑制作用最明显，其48h的抑制率为7

2、2.5%，与未加药对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)；荧光显微镜下经丹参酮IIA作用后的肝癌细胞可见凋亡小体形成；免疫细胞化学染色及ELISA法检测发现，丹参酮IIA作用组肝癌细胞VEGF表达和培养液中VEGF分泌量明显减少，与未加药对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论丹参酮IIA可下调细胞VEGF的表达，这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。ABSTRACT:ObjectiveToevaluatetheeffectsofTanshinoneIIAininhibitingtheproliferation,inducing

3、apoptosisandtheexpressionofvascularendothelialgroormechanismofTanshinoneIIA.MethodsThehumanhepatocellularcarcinomacelllineSMMC7721icroscope.TheexpressionofVEGFofSMMC7721cellandthecellculturefluidinedbyimmunocytochemistryandELISAassay,respectively.ResultsTanshinoneIIAtreatmen

4、tofSMMC7721cellsresultedinastronggroanner.Thepeakvalueofinhibitionrate(72.5%)reachedat0.5mg/LTanshinoneIIAfor48h,andthereationofapoptoticbodiesofSMMC7721cellicroscope.TheexpressionofVEGFinTanshinoneIIAtreatedgroupilarresultcouldbeobservedincellculturefluidayberelatedtothedo

5、a;proliferationinhibition;apoptosis晚期肝癌的临床表现在中医诊断中属于血瘀症，中医治则中多运用活血化瘀法。丹参是一种有效的活血化淤中药。丹参酮IIA是从丹参中提取的一种醇溶性成分，具有清除氧自由基、抗脂质过氧化的作用。近年来的研究表明，丹参酮IIA对多种肿瘤细胞具有直接杀伤作用，但其确切的作用机制尚不十分清楚[12]。肿瘤血管的生成是由一系列促血管生成因子引发和维持的病理性血管生成过程，肿瘤的生长和转移依赖新生血管的形成，并受血管内皮生长因子(vascularendothelialgroL/L)，4℃冷藏备用。R

6、PMI1640培养液、小牛血清购自GIBCO公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自美国Sigma公司，DMSO溶解，4℃冷藏备用；VEGF鼠抗人单克隆抗体(工作浓度为1∶80)及免疫细胞化学SABC试剂盒(即用型)均购自北京中山生物技术中心；Hoechst33342购自武汉博士德试剂公司；ELISA全套免疫试剂盒购自深圳晶美生物工程公司；酶标仪为Sigma公司产品；荧光显微镜为德国LEICA公司产品。1.2细胞培养及实验分组SMMC7721肝癌细胞在含150mL/L小牛血清的RPMI1640培养基中37℃、50mL/LCO2条件下常规传代培养。传

7、1代培养的SMMC7721肝癌细胞用含150mL/L小牛血清的RPMI1640制备为2×105个/mL细胞悬液，分组培养，加入不同质量浓度的丹参酮IIA及终浓度300μmol/L的尼美舒利(选择性环氧合酶2抑制剂)进行实验，并以加入等体积的培养液为未加药对照组。1.3MTT比色法观察细胞的增殖细胞悬液接种于96孔板，每孔200μL，生长24h后，随机分8组，每组6复孔。1到6组分别加入终质量浓度为0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0mg/L的丹参酮IIA，第7组加入尼美舒利，第8组加入等体积的培养液。分别作用24、48、72h后

8、每孔加入5g/L的MTT贮存液20μL继续孵育4h，弃上清并每孔加150μL的DMSO溶解细胞内结晶，酶标仪490nm波长