欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:22378095
大小:57.00 KB
页数:8页
时间:2018-10-28
《sirna对胃腺癌细胞株sgc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、siRNA对胃腺癌细胞株SGC【关键词】RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达 [摘要]目的研究siRNA对人胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法利用体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段,转录针对VEGFmRNA的siRNA,通过脂质体2000将合成的siRNA转染入SGC-7901细胞,设置转染VEGF错义序列组、脂质体组、空白对照组作为对照,用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR检测转染后VEGFmR
2、NA表达水平的变化,ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化。结果所设计的两个靶位点siRNA均能有效抑制胃腺癌细胞的生长,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGFmRNA的表达也受到有效抑制,明显减少;同时,对应的VEGF蛋白水平也显著降低,作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有出现这种变化。结论体外转录合成的siRNA可抑制胃腺癌SGC-7901细胞VEGF基因的表达。 [关键词]RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达 [ABSTRACT]ObjectiveToe
3、valuatethegeneexpressionofVEGFbyRNAinterferenceinhumangastriccancer.MethodssiRNAstargetingVEGFmRNAangastriccancercelllinesSGC-7901ine2000.Thenon-transfectedcells,cellstreatedineandcellstreatedetryRNAlevelallinterferingRNA(siRNA)targetinghumanVEGFeffe
4、ctivelyinhibitedtheproliferationofgastriccancerSGC-7901.Itaffectedthedistributionofcellcycle,increasedcellpopulationinG0/G1phaseanddecreaseditinSphase.TheexpressionofVEGFmRNAblesiRNA.ConclusionThelevelofVEGFgeneexpressionofSGC-7901cellscanbedeclinedb
5、ytransfecteds;vascularendothelialgroRNA产生特异性降解,其相应的基因受到抑制,这种发生在转录后的基因静寂现象被称为RNA干扰(RNAi)[1~3]。体内外实验证实,21~23bp的siRNA(smallinterferenceRNA)可特异性地发挥RNAi作用[4]。胃癌是我国最常见的消化道肿瘤,其病死率居各种恶性肿瘤之首[5~7]。探索治疗胃腺癌的新方法具有重要临床价值。本实验以VEGF基因为靶标,设计合成siRNA,通过脂质体转染的方法将其转入胃腺癌细胞
6、株SGC-7901,研究其静寂VEGF基因表达的效应,为临床进一步应用提供理论依据。现将结果报告如下。 1材料和方法 1.1材料及其SGC-7901细胞购自中国协和基础学院细胞中心。DMEM培养基、LipofectamineTM2000、TRIzolReagent、RPMI1640购自Invitrogen公司。T7Ri-boMAXTMExpressRNAiSystem试剂盒、AccessRT-PCRIntroductorySystem购自Promega公司。四唑氮蓝(MTT)购自Sigma公
7、司。人VEGFELISA Kit购自武汉博士德生物工程有限公司。 1.2siRNA的制备从GenBank中获取已知的人VEGFmRNA序列(ACCESSION:AB021221)。依据Promega公司提供的设计软件和试剂盒设计合成siRNA序列,见表1。 表1设计合成的siRNA序列(略) 1.3细胞培养SGC-7901细胞用含体积分数0.10新生牛血清的RPMI1640培养基,于37℃、体积分数为0.05CO2条件下培养。 1.4MTT法检测细胞抑制率取对数生长期的SGC-7901细
8、胞,配制6×107/L浓度的细胞悬液,加到96孔板内(Corning,美国),每孔加100μL。设空白对照组、脂质体组、错义序列组(错义序列组SCR序列与siRNA2序列有相同的GC组成,但是和人的mRNA没有明显的同源性,以此作为阴性对照[8])、siRNA各剂量组,每组5孔,接种24h后弃去上清,采用脂质体包裹的方式转染siRNA。siRNA1和siRNA2两组分别设立4个浓度,分别为100、200、400、1000nmol/L,分别定义为低、中、高、极高剂量组;siRNASCR组只设200
此文档下载收益归作者所有