sirna对胃腺癌细胞株sgc

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1、siRNA对胃腺癌细胞株SGC【关键词】RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达　　［摘要］目的研究siRNA对人胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子（VEGF）基因表达的影响。方法利用体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段，转录针对VEGFmRNA的siRNA，通过脂质体2000将合成的siRNA转染入SGC-7901细胞，设置转染VEGF错义序列组、脂质体组、空白对照组作为对照，用MTT法检测细胞抑制率，流式细胞仪检测细胞周期的改变，RT-PCR检测转染后VEGFmR

2、NA表达水平的变化，ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化。结果所设计的两个靶位点siRNA均能有效抑制胃腺癌细胞的生长，并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGFmRNA的表达也受到有效抑制，明显减少;同时，对应的VEGF蛋白水平也显著降低，作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有出现这种变化。结论体外转录合成的siRNA可抑制胃腺癌SGC-7901细胞VEGF基因的表达。　　［关键词］RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达　　［ABSTRACT］ObjectiveToe

3、valuatethegeneexpressionofVEGFbyRNAinterferenceinhumangastriccancer.MethodssiRNAstargetingVEGFmRNAangastriccancercelllinesSGC-7901ine2000.Thenon-transfectedcells，cellstreatedineandcellstreatedetryRNAlevelallinterferingRNA（siRNA）targetinghumanVEGFeffe

4、ctivelyinhibitedtheproliferationofgastriccancerSGC-7901.Itaffectedthedistributionofcellcycle，increasedcellpopulationinG0/G1phaseanddecreaseditinSphase.TheexpressionofVEGFmRNAblesiRNA.ConclusionThelevelofVEGFgeneexpressionofSGC-7901cellscanbedeclinedb

5、ytransfecteds;vascularendothelialgroRNA产生特异性降解，其相应的基因受到抑制，这种发生在转录后的基因静寂现象被称为RNA干扰（RNAi）［1～3］。体内外实验证实，21～23bp的siRNA（smallinterferenceRNA）可特异性地发挥RNAi作用［4］。胃癌是我国最常见的消化道肿瘤，其病死率居各种恶性肿瘤之首［5～7］。探索治疗胃腺癌的新方法具有重要临床价值。本实验以VEGF基因为靶标，设计合成siRNA，通过脂质体转染的方法将其转入胃腺癌细胞

6、株SGC-7901，研究其静寂VEGF基因表达的效应，为临床进一步应用提供理论依据。现将结果报告如下。　　1材料和方法　　1.1材料及其SGC-7901细胞购自中国协和基础学院细胞中心。DMEM培养基、LipofectamineTM2000、TRIzolReagent、RPMI1640购自Invitrogen公司。T7Ri-boMAXTMExpressRNAiSystem试剂盒、AccessRT-PCRIntroductorySystem购自Promega公司。四唑氮蓝（MTT）购自Sigma公

7、司。人VEGFELISA　Kit购自武汉博士德生物工程有限公司。　　1.2siRNA的制备从GenBank中获取已知的人VEGFmRNA序列（ACCESSION:AB021221）。依据Promega公司提供的设计软件和试剂盒设计合成siRNA序列，见表1。　　表1设计合成的siRNA序列（略）　　1.3细胞培养SGC-7901细胞用含体积分数0.10新生牛血清的RPMI1640培养基，于37℃、体积分数为0.05CO2条件下培养。　　1.4MTT法检测细胞抑制率取对数生长期的SGC-7901细

8、胞，配制6×107/L浓度的细胞悬液，加到96孔板内（Corning，美国），每孔加100μL。设空白对照组、脂质体组、错义序列组（错义序列组SCR序列与siRNA2序列有相同的GC组成，但是和人的mRNA没有明显的同源性，以此作为阴性对照［8］）、siRNA各剂量组，每组5孔，接种24h后弃去上清，采用脂质体包裹的方式转染siRNA。siRNA1和siRNA2两组分别设立4个浓度，分别为100、200、400、1000nmol/L，分别定义为低、中、高、极高剂量组;siRNASCR组只设200