鼻咽癌pcdgf表达及sirna对hne-1细胞株增殖的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文鼻咽癌PCDGF表达及siRNA对HNE--1细胞株增殖的影响姓名：梁佳申请学位级别：硕士专业：耳鼻咽喉科学指导教师：陈鸿雁201205鼻咽癌PCDGF表达及siRNA对HNE．1细胞株增殖的影响中文摘要背景：鼻咽癌(nasoph唧ngealcarcinoma，NPC)是中国南方常见的一种头颈部恶性肿瘤，其恶性程度高，具有强大的侵袭转移能力，且发病部位隐蔽，早期诊断难。畸胎瘤细胞源性生长因子(PCcell—d嘶ved伊owmfactor，PCDGF)又名pro伊anulin，acro伊aJlin，属于生长因子家族：颗粒蛋白(伊aJlulin，

2、GRN)中的一员，其在多种肿瘤中高表达，如乳腺癌‘2】【31，卵巢癌‘41，食管鳞状细胞癌‘51，非小细胞肺剧61，多发性骨髓细胞瘤‘71等，参与肿瘤的发生、增殖、浸润、转移。因此沉默肿瘤细胞中PCDGF表达有助于防治肿瘤的增殖转移。IⅢAi是一种抑制特定基因产物表达的有效方法，是由双链RNA(dsIWA)介导的特异性降解相应序列的mRNA，导致靶基因的沉默‘81。本研究采用RNA干扰技术，沉默PCDGF表达，探讨其对鼻咽癌细胞株HNE一1生物学行为的影响，以期为鼻咽癌的诊断与治疗提供实验室依据。目的：探讨畸胎瘤细胞源性生长因子(PCcell一d甜ved伊owthf

3、actor，PCDGF)在人鼻咽癌中的表达，并研究其表达与患者临床病理特征之间的关系。构建针对PCDGF特异性的小干扰RNA(smallinter矧mgRNA，siRNA)，研究其对鼻咽癌HNE．1细胞增殖的影响。方法：采用免疫组织化学的方法检测53例鼻咽癌，28例鼻咽慢性气重庆医科大学硕士研兜生学位论文炎症组织中PCDGF蛋白的表达情况，并结合患者的临床病理资料对结果进行统计分析；同时采用荧光免疫细胞化学法检测人鼻咽癌细胞株HNE一1细胞PCDGF表达。根据PCDGF基因设计合成两条siRNA，利用1ipofectamineTM2000转染鼻咽癌HNE．1细胞，并

4、在荧光显微镜下检测转染效率。通过real—timePCR、Westemblot检测转染后细胞PCDGFmRNA和蛋白表达，采用MTT检测转染后细胞的生长增殖情况，FCM法检测细胞周期分布。结果：53例鼻咽癌组织中PCDGF阳性表达率为82．02％(44／53)，28例鼻咽部慢性炎症组织中阳性率为17．86％(5／28)，两组间差异有统计学意义(P0．05)。2条重组质粒均能特异性的抑制PCDGFmRNA和蛋白的表达，其中siRNA．1的沉默效率最

5、高。转染48h后，HNE一1细胞中PCDGFmI酬A和蛋白表达水平分别下调59．3％和57．6％，细胞增殖抑制率为(37．07±12．4)％，siRNA一1组GO／G1期细胞增多，S期细胞数量明显减少(P

6、instproliferationofnasopharyngealcarcinomaHNE-1ceIllineABSTRACTBack伊ound：Nasopha拶ngealcarcinoma(NPC)isoneofthemostcommoncancersinSouth—CIlina．IthasaHighdegreeofmalignancy，power向linVasionandmetastasis．becauseofthediseasedpartsofthe11idden，Itcannotbeearlydiagnosed．ThePCcell-derived伊owthf

7、actor(PCDGF)Alsoknownaspro乒anulin，acro伊anin，Belongtome乒owthfactorfamily：乒anulin(GI之N)which11ighlyexpressedintumorincludinghumaIlbreastcancer，oV撕ancancer’esophagealsqu锄ouscellcarcinoma，non—smallceHlungcaJlceraJldmultiplemyeloma．ItInvolvedinmetumoroccurrence，deVelopment，prolifera廿on，in