siRNA对胃腺癌细胞株SGC7901血管内皮生长因子基因表达的作用

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1、siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用【关键词】RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达　　［摘要］目的研究siRNA对人胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子（VEGF）基因表达的影响。方法利用体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段，转录针对VEGFmRNA的siRNA，通过脂质体2000将合成的siRNA转染入SGC-7901细胞，设置转染VEGF错义序列组、脂质体组、空白对照组作为对照，用MTT法检测细胞抑制率，流式细胞仪检测细胞周期的改变

2、，RT-PCR检测转染后VEGFmRNA表达水平的变化，ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化。结果所设计的两个靶位点siRNA均能有效抑制胃腺癌细胞的生长，并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGFmRNA的表达也受到有效抑制，明显减少;同时，对应的VEGF蛋白水平也显著降低，作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有出现这种变化。结论体外转录合成的siRNA可抑制胃腺癌SGC-7901细胞VEGF基因的表达。　　［关键词］RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达　　［ABSTR

3、ACT］ObjectiveToevaluatethegeneexpressionofVEGFbyRNAinterferenceinhumangastriccancer.MethodssiRNAstargetingVEGFmRNAwasobtainedbyinvitrotranscription，whichwastransfectedintohumangastriccancercelllinesSGC-7901withLipofectamine2000.Thenon-transfectedcells，

4、10cellstreatedwithLipofectimineandcellstreatedwithSCRweretakenascontrols.MTTwasusedtodetecttheinhibitiverateofcellgrowth.Flowcytometrywasusedtodetectthechangesofcyc-lingofthecell.TheinhibitiveeffectofsiRNAonmRNAlevelwasdetectedbyRT-PCR，thesecretionofVE

5、GFproteininthesu-pernatantbyELISA.ResultsThesmallinterferingRNA（siRNA）targetinghumanVEGFeffectivelyinhibitedtheproliferationofgastriccancerSGC-7901.Itaffectedthedistributionofcellcycle，increasedcellpopulationinG0/G1phaseanddecreaseditinSphase.Theexpres

6、sionofVEGFmRNAwassignificantlyinhibitedinSGC-7901;otherwise，VEGFproteinnotablydecreased，buttheeffectsdidnotappearincontrolscramblesiRNA.ConclusionThelevelofVEGFgeneexpressionofSGC-7901cellscanbedeclinedbytransfectedwithsiRNA.　　［KEYWORDS］RNAinterference

7、;gastricneoplasms;vascularendothelialgrowthfactor;geneexpression　　肿瘤血管的形成受多种因子的调节，其中血管内皮生长因子（VEGF）是作用最强、特异性最高的一种能刺激细胞运动和肿瘤血管生成的因子，与肿瘤的发生、发展关系密切。将外源性或内源性双链RNA（dsRNA）导入细胞后引起与该段RNA同源的mRNA产生特异性降解，其相应的基因受到抑制，这种发生在转录后的基因静寂现象被称为RNA干扰（RNAi）［1～3］。体内外实验证实，21～23b

8、p的siRNA（small10interferenceRNA）可特异性地发挥RNAi作用［4］。胃癌是我国最常见的消化道肿瘤，其病死率居各种恶性肿瘤之首［5～7］。探索治疗胃腺癌的新方法具有重要临床价值。本实验以VEGF基因为靶标，设计合成siRNA，通过脂质体转染的方法将其转入胃腺癌细胞株SGC-7901，研究其静寂VEGF基因表达的效应，为临床进一步应用提供理论依据。现将结果报告如下。　　1材料和方法　　1.1材料及其来源SGC-7901细胞购自中国协和基础学院细