人胃腺癌细胞株ags、sgc-7901增殖诱导配体mrna的表达

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1、人胃腺癌细胞株AGS、SGC-7901增殖诱导配体mRNA的表达【摘要】目的：比较人AGS、SGC-7901两种胃癌细胞株中增殖诱导配体(APRIL)mRNA的表达水平。方法：通过半定量RT-PCR检测APRILmRNA，筛选出APRILmRNA高表达细胞株。结果：以GAPDH为内参，通过计算机图像扫描系统分析各株细胞APRILmRNA的表达量,获得人胃腺癌细胞株APRILmRNA表达量的相对值，AGS0.09，SGC-79010.61。结论：SGC-7901为APRILmRNA高表达细胞株。【关键词】胃腺癌聚合酶链反应增殖诱导配体[Abstract]Objective:Todete

2、cttheexpressionofhuman’sstomachadenocarcinomacellline’sAPRILinthemRNAlevelbysemi-quantitaiveRT-PCR.Methods:WedetectedtheexpressionofAPRILmRNAinstomachadenocarcinomacellline(AGSandSGC-7901)byRT-PCR,andthenselectedhigh-levelexpressioncellline.Results:Usingbytheimagescanningsystem，GAPDHastheintern

3、alcontrol,wegettherelativevalueofAGS0.09，SGC-79010.61.Conclusion:Selectinghigh-levelexpressionAPRILmRNAcelllineinstomachadenocarcinomabysemi-quantitativeRT-PCR,itdoesplayafundamentalroleintheresearchformolecularmechanismforstomachcancerdevelopingandmetastasizing.9[Keywords]Stomachadenocarcinoma

4、;Polymerasechainreaction;Aproliferation-inducingligand增殖诱导配体（aproliferation-inducingligand，APRIL）是肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor，TNF)超家族的成员之一[1，2]。主要通过靶细胞表面的两个受体——穿膜蛋白活化物(TACI)和B细胞成熟抗原(BCMA)结合，从而促进肿瘤细胞的增殖，调节体液免疫，并参与B、T淋巴细胞增殖和活化[3~8]。已有研究证实APRIL在体内和体外均能刺激肿瘤细胞生长，说明它与肿瘤生长的调节关系密切[3]。我们研究发现APRIL在胃癌病变演变过

5、程中呈现累积和渐进趋势。提示APRIL在胃癌发生、发展过程中可能起重要作用，但其分子机制还有待进一步研究证实。本研究采用半定量RT-PCR技术从2株胃腺癌细胞株中筛选出APRIL基因高表达细胞株，为进一步了解它在胃腺癌发生、发展过程中的作用及其分子机制等研究奠定实验基础。1材料与方法1.1材料（1）细胞株及培养液：胃腺癌细胞株AGS、SGC-7901和胰腺癌细胞株CFPAC-1（中科院上海生科院细胞资源中心），DMEM、IMDM、RPMI1640和Ham’9sF12k细胞培养基（美国Invitrogen公司），新生牛血清和胎牛血清（Hyclone公司）；（2）主要试剂和仪器：TRIz

6、ol（Invitrogen公司），TaKaRa逆转录试剂盒、Taq聚合酶、限制性内切酶（TaKaRa生物技术公司，大连），XPThermalcyclePCR仪（杭州博日），QueueStabil-Therm37℃恒温孵育箱(RevcoTechnologiesUSA)；（3）引物：根据GenBankAPRIL基因序列（NM003808.2）和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列（NM002064），利用VECTORNTI软件，设计引物，并由上海申能博彩生物工程公司合成。序列APRIL1-F:5'–TCCGATGTGACAGAGGTGATG-3',APRIL1-R:5'-AATGGAA

7、GACACCTGCGCTAT-3';APRIL2-R:5'-GCATACTTCTTATACATCGGAATAG-3';GAPDH-F:5'-TTAGCACCCCTGGCCAAGG-3',GAPDH-R:5'-CTTACTCCTTGGAGGCCATG-3'。1.2方法1.2.1细胞培养分别用含10%胎牛血清的DMEM、IMDM、RPMI1640、Ham’sF12k和RPMI91640培养液，单层培养CFPAC-1、胰腺癌细胞株和AGS、SGC-7901胃腺癌