focx1对胃癌细胞sgc-7901增殖的影响及其在胃腺癌组织中的表达和意义

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1、重庆医科大学硕士学位论文FOCX1对胃癌细胞SGC--7901增殖的影响及其在胃腺癌组织中的表达和意义姓名：张瑶申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：刘纯伦201205FOXCl对胃癌细胞SGC．7901增殖的影响及其在胃腺癌组织中的表达和意义摘要目的：1．构建FOXCl短发夹RNA干扰质粒，探讨FOXCl对胃癌细胞SGC一7901增殖的影响，为胃癌发病机制的研究和基因治疗提供新的靶点。2．检测FOXCl蛋白在胃腺癌组织中的表达，探讨FOXCl与胃腺癌临床生物学行为之间的关系。方法：1．设计针对人FOXCl基因的短发夹RNA序列，通过

2、退火及酶切等连接至pGensil一1质粒上，转化感受态大肠杆菌菌株DH50t，挑选单克隆菌落提取重组质粒pshRNA—FOXCl。、pshRNA—FOXClb及pshRNA—FOXCl。，酶切及测序鉴定重组质粒是否构建成功，并以脂质体2000为介导将质粒转染至SGC．7901细胞中，荧光显微镜下观察转染情况。2．RT-PCR及Westernblot检测胃癌细胞SGC一7901和胃粘膜上皮细胞GES．1中FOXClmRNA及蛋白质的表达。3．实验分组：pshRNA—FOXCl。组、pshRNA—FOXClb组、pshRNA—FOXCl。组

3、、pGenesil一1组及SGC．7901组，RT-PCR和Westernblot检测重组质粒对SGC．7901细胞中FOXClmRNA及蛋白的沉默效应，MTT及流式细胞术检测其对细胞增殖及周期的影响。4．免疫组织化学法检测胃腺癌组织中FOXCl蛋白的表达，分析该蛋白与胃腺癌临床生物学行为之间的关系。结果：1．测序结果显示，重组质粒pshRNA—FOXCl。、pshRNA-FOXClb及pshRNA．FOXCl。插入序列正确，无突变，与设计一致，重组质粒构建成功。将重组质粒转染SGC一7901细胞后在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。2

4、．FOXCl在SGC一7901和GES一1细胞中均有表达，RT-PCR结果示：FOXClmRNA在SGC．7901细胞(1．37土0．16)中的表达显著高于GES．1细胞(O．70±0．06)(尸

5、l。组(62．14士7．07)中的表达显著低于pGenesil—l组(84．36士6．99)及SGC．7901组(84．61土7．18)(尸<0．05)；Westernblot显示：FOXCl蛋白pshRNA—FOXCl。组(38．4411．90)、pshRNA—FOXClb组(39．2010．27)、pshRNA—FOXCl。组(38．2512．03)中的表达显著低于pGenesil一1组(63．82+3．08)及SGC．7901组(65．03士2．52)(尸

6、l。组、pshRNA—FOXClb组、pshRNA．FOXCl。组在24h、48h及72h的细胞增4殖抑制率与对应时间点pGensil．1组的细胞增殖抑制率相比，细胞增殖能力受到明显抑制(尸<0．05)；流式细胞仪结果显示：pshRNA．FOXCla组、pshRNA—FOXClb组、pshRNA-FOXClc组处于Gl、G2期细胞的百分率较SGC．7901组显著增加(氏O．05)，处于S期细胞的百分率较SGC．7901组显著减少(P

7、．25例胃腺癌组织中FOXCl的表达率为62．5％，该蛋白定位于细胞核与细胞浆。FOXCl在淋巴结转移组的表达率为75％，明显高于无淋巴结转移组33．3％(P

8、1ANDBIOLOGICALBEHAVIOURSOFGASTRICADENoCARCINOMLAABSTRACTObjective：ToinvestigatetheroleofFOXC1inhumangas