focx1对胃癌细胞sgc-7901增殖的影响及其在胃腺癌组织中的表达和意义

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1、重庆医科大学硕士学位论文FOCX1对胃癌细胞SGC--7901增殖的影响及其在胃腺癌组织中的表达和意义姓名:张瑶申请学位级别:硕士专业:内科学指导教师:刘纯伦201205FOXCl对胃癌细胞SGC.7901增殖的影响及其在胃腺癌组织中的表达和意义摘要目的:1.构建FOXCl短发夹RNA干扰质粒,探讨FOXCl对胃癌细胞SGC一7901增殖的影响,为胃癌发病机制的研究和基因治疗提供新的靶点。2.检测FOXCl蛋白在胃腺癌组织中的表达,探讨FOXCl与胃腺癌临床生物学行为之间的关系。方法:1.设计针对人FOXCl基因的短发夹RNA序列,通过

2、退火及酶切等连接至pGensil一1质粒上,转化感受态大肠杆菌菌株DH50t,挑选单克隆菌落提取重组质粒pshRNA—FOXCl。、pshRNA—FOXClb及pshRNA—FOXCl。,酶切及测序鉴定重组质粒是否构建成功,并以脂质体2000为介导将质粒转染至SGC.7901细胞中,荧光显微镜下观察转染情况。2.RT-PCR及Westernblot检测胃癌细胞SGC一7901和胃粘膜上皮细胞GES.1中FOXClmRNA及蛋白质的表达。3.实验分组:pshRNA—FOXCl。组、pshRNA—FOXClb组、pshRNA—FOXCl。组

3、、pGenesil一1组及SGC.7901组,RT-PCR和Westernblot检测重组质粒对SGC.7901细胞中FOXClmRNA及蛋白的沉默效应,MTT及流式细胞术检测其对细胞增殖及周期的影响。4.免疫组织化学法检测胃腺癌组织中FOXCl蛋白的表达,分析该蛋白与胃腺癌临床生物学行为之间的关系。结果:1.测序结果显示,重组质粒pshRNA—FOXCl。、pshRNA-FOXClb及pshRNA.FOXCl。插入序列正确,无突变,与设计一致,重组质粒构建成功。将重组质粒转染SGC一7901细胞后在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。2

4、.FOXCl在SGC一7901和GES一1细胞中均有表达,RT-PCR结果示:FOXClmRNA在SGC.7901细胞(1.37土0.16)中的表达显著高于GES.1细胞(O.70±0.06)(尸

5、l。组(62.14士7.07)中的表达显著低于pGenesil—l组(84.36士6.99)及SGC.7901组(84.61土7.18)(尸<0.05);Westernblot显示:FOXCl蛋白pshRNA—FOXCl。组(38.4411.90)、pshRNA—FOXClb组(39.2010.27)、pshRNA—FOXCl。组(38.2512.03)中的表达显著低于pGenesil一1组(63.82+3.08)及SGC.7901组(65.03士2.52)(尸

6、l。组、pshRNA—FOXClb组、pshRNA.FOXCl。组在24h、48h及72h的细胞增4殖抑制率与对应时间点pGensil.1组的细胞增殖抑制率相比,细胞增殖能力受到明显抑制(尸<0.05);流式细胞仪结果显示:pshRNA.FOXCla组、pshRNA—FOXClb组、pshRNA-FOXClc组处于Gl、G2期细胞的百分率较SGC.7901组显著增加(氏O.05),处于S期细胞的百分率较SGC.7901组显著减少(P

7、.25例胃腺癌组织中FOXCl的表达率为62.5%,该蛋白定位于细胞核与细胞浆。FOXCl在淋巴结转移组的表达率为75%,明显高于无淋巴结转移组33.3%(P

8、1ANDBIOLOGICALBEHAVIOURSOFGASTRICADENoCARCINOMLAABSTRACTObjective:ToinvestigatetheroleofFOXC1inhumangas

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