大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的lc-ms分析

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1、大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的LC-MS分析药物分析杂志2000年第1期第20卷研究论文作者：姚庆强　王琰　杨树民　王慕邹单位：姚庆强　王琰　王慕邹（中国医学科学院　中国协和医科大学药物研究所　北京　100050）；杨树民（中国兴奋剂检测中心，北京100029）关键词：(+)，(-)-黄皮酰胺　肝微粒体　体外代谢　高效液相色谱-质谱　电喷雾　　摘　要：目的：建立黄皮酰胺及其代谢产物的HPLC-ESI-MS在线检测分析方法，并对未分离得到的微量代谢产物进行分析确证，探索LC-MS在代谢转化研究中的应用。方法：利用柱后补偿技术，采用正离子检测对大鼠肝微粒体中(+)

2、，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物进行HPLC-ESI-MS分析，根据MS的碎片信息检测主要的代谢产物，特别是对未分离得到的代谢产物的结构碎片进行分析，确定其结构。结果：除检测出主要已知代谢产物外，尚检测出一新的代谢产物，通过质谱碎片分析推断其结构为3-去氢黄皮酰胺，进一步完善了黄皮酰胺的代谢途径。结论：LC-MS用于代谢转化的研究，方便快速，为该技术在代谢转化中的应用提供了一种参考。LC-MSAnalysisof(+)and(-)-Clausenamide　　andTheirMetabolitesinRatLiverMicrosomesYaoQingqiang　WangYan　WangMuz

3、ou　　（Instituteofmateriamedica,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Beijing　100050）　　YangShumin　　（ChinaDopingControlCenter,Beijing100029）　　Abstract：Objectives：TheHPLC-ESI-MSonlineanalyticalmethodwasdevelopedforthedeterminationoftheminutemetabolitesof(+)and(-)-clausenamideafte

4、rincubationwithratlivermicrosomes.Methods:TheHPLC-MSanalysisof(+)and(-)-clausenamideandtheirmetaboliteswasusedwithpost-columnmodificationandpositivepolarity.ThestructuresofthemetaboliteswereanalyzedbytheirMSdata.Results:Besidesthemainknownmetabolites,anunknownmetabolite,3-dehydroclausenamidewasdet

5、ermined.Conclusion:ThemetabolicpathwayofclausenamidewascomplementedbythisresearchandtheLC-MSmethodisaveryusefulmethodintheresearchofdrugmetabolism.　　Keywords：(+)and(-)-clausenamide,livermicrosome,metabolisminvitro,highperformanceliquidchromatography-massspectrometry,electrosprayionization▲　　黄皮酰胺是芸

6、香科黄皮属植物黄皮Clausenalansium(Lour.)Skeels叶水浸膏中分离得到的有效成分［1］，经不对称合成和拆分得到左旋和右旋黄皮酰胺［2］，其中左旋体有较好的促智作用，右旋体作用不明显且有较强的毒性［3，4］，其化学结构见图1。图1　(-)和(+)-黄皮酰胺的结构　　我们曾报道了左旋及右旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化［5，6］，分离纯化了6个代谢产物，通过1H-NMR，FAB-MS，EI-MS鉴定其结构分别为：6-羟基-(CM1)，5-羟基-(CM2)，4-羟基-(CM3)，4，6-二羟基-(CM4)，4-苯环邻位-羟基-(CM5)，4，7-苯环间位-二羟基-(CM

7、6)黄皮酰胺。为进一步寻找未分离得到的代谢产物，并拟探索液相色谱-质谱联用技术在代谢转化研究中的应用，本文对黄皮酰胺及其代谢产物进行了HPLC-ESI-MS在线分析，分别检测出了肝微粒体温孵体系中的(-)，(+)-黄皮酰胺及其主要已知的代谢产物，并根据结构碎片信息，推断出一个未报道的代谢产物，其结构为3-去氢黄皮酰胺(3-dehydroclausenamide,CM7)，进一步完善了黄皮酰胺的代谢途径。　　1　材料与仪器