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1、德尔卑沙门菌PFGE分型探索摘要：［目的］用脉冲凝胶电泳方法绘制德尔卑沙门菌的DNA指纹图谱，为研究德尔卑沙门菌的同源性提供分子生物学技术依据。［方法］从本实验室在各类食品中分离到的12株德尔卑沙门菌中提取DNA，经过限制性内切酶ba1的切割，再用脉冲凝胶电泳仪进行DNA分子分型，并使用QuantityOneTM软件对其同源性进行分析比较。［结果］实验得到10株菌的DNA指纹图谱，与2003年D1号菌株遗传基因密切相关的菌株占22%；与2004年D15号菌株遗传基因密切相关的菌株占44%；2005年的4株菌中有3株之
2、间的遗传基因密切相关；2006年的4株菌，分别为2株之间的遗传基因密切相关。［结论］脉冲凝胶电泳方法是分析引起食源性疾病的致病菌的同源性的有效方法。关键词：德尔卑沙门菌；脉冲凝胶电泳；同源性；相似系数中图分类号：R117文献标识码：ＡMolecularsubtypingofalmonellaDerbybyPFGEWANGYing,GUQi-fang,CHENMin,LIUCheng,ZHANGMei-ying,ZHOUPei-jun（Departmentoffoodsafety,hanghaiCenterforDis
3、easecontroland10Prevention,200336,china）Abstract)：［Objective］Todrawa“fingerprint”ofalmonellaDerbybyPFGE,forresearchingthesourceofoneofthefoodbornedisease-causingbacteria.［Methods］CutDNAofbacteriausingrestrictionenzymeba1andrunningthegel�usingChefMapper(Bio-Rad.
4、Analyzethesourceofthesestrainsusingsoftware-QuantityOneTM.［Results］ComparedwithD1,22%strainshadcloserelationshipwithit,ComparedwithD15,44%strainshadcloserelationshipwithit.Amongthe4strainsfrom2005,3strainshadcloserelationshiprespectively,amongthe4strainsof2006,
5、2strainshadcloserelationshiprespectively.［Conclusion］PFGEisaveryusefulmethodtoanalyzethesourceoffoodbornedisease―thecausingbacteria.Keywords)：almonellaDerby；Pulsed-fieldgelelectrophoresis(PFGE；ourcesimilarity;imilarycoefficient10自1888年，Gartner从一起因集体食物中毒而死亡的死者中分
6、离到沙门菌以来，确认沙门菌的致病性已有一个多世纪［１］。当今，沙门菌引起的食物中毒仍然威胁着世界人民的身体健康，每年造成数千万美元的经济损失。2003～2006年，我们实验室从各部位生猪肉中检测到12株德尔卑沙门菌（al.derby）。传统的生化、血清学方法只能鉴定到沙门菌的血清型，而对于同一血清型的不同菌株的分析比较却无能为力［2］。为了分析比较从不同食品中分离到的同一血清型的沙门菌在分子生物学水平的异同，本实验室采用脉冲凝胶电泳方法对这12株德尔卑沙门菌进行DNA分型和指纹图谱的比较，并且分析其同源性，为研究德尔
7、卑沙门菌引起的食源性疾病提供分子生物学水平分析数据。��1材料与方法�1.1材料�1.1.1菌株2003～2006年从猪的各种部位检测到的德尔卑沙门菌共12株，编号见表1。��表12003～2006年从各类食品中�检测到的德尔卑沙门菌的编号�1.1.2试剂本实验方法所用试剂有营养琼脂斜面（上海市疾病预防控制中心培养基室）；1MTris-HClpH7.6;0.5MEDTApH7.6；细胞悬浊液（10ml1MTris-HClpH7.6,20ml0.5MEDTA10pH7.6，加纯水至1000ml，高压灭菌）；细胞裂解液（
8、25ml1MTris-HClpH7.6,50ml0.5MEDTApH7.6，5g十二烷基肌氨酸钠（igma公司）,加纯水至500ml，不可高压）；TEBuffer(10ml1MTris-HClpH7.6,2ml0.5MEDTApH7.6加蒸馏水至1000ml；蛋白酶K（默克公司，反应的终浓度为0.5mg/ml），baI（Promega公司，切割
