迷迭香酸对慢性肾功能不全大鼠系膜基质及tgfβ1的影响论文

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1、迷迭香酸对慢性肾功能不全大鼠系膜基质及TGFβ1的影响论文林威远,黄荣桂,郑兴中【摘要】目的观察迷迭香酸对慢性肾功能不全模型大鼠系膜基质及转化生长因子β1(TGFβ1)的影响。方法制作大鼠慢性肾功能不全模型(5/6肾切除),以迷迭香酸作为干预因素,应用免疫组织化学半定量法测定迷迭香酸对大鼠系膜基质成分纤维连接蛋白(Fn)、胶原Ⅳ(ColⅣ)及TGFβ1的影响,电镜观察肾小球病理学变化,测定血、尿肌酐值。结果(1)与对照组比较,迷迭香酸组肌酐清除率(Ccr)水平升高(P0.05);(2)Fn、ColⅣ在肾脏细胞外基质的沉积减少(P0.05);(3)TGFβ1表达减少(P0.05)。

2、结论迷迭香酸可以抑制TGFβ1的表达,减少Fn及ColⅣ在肾小球细胞外基质的沉积,延缓肾小球硬化,对慢性肾功能不全疾病可能具有治疗价值。【关键词】迷迭香酸;肾小球;细胞外基质;肾切除术;转化生长因子β;疾病模型,动物细胞外基质(ECM)的增加是慢性进行性肾小球病变的特征,肾小球ECM积聚是肾小球疾病发展至肾小球硬化的主要病理改变基础。多种细胞因子通过对系膜细胞的作用参与调节肾小球ECM的分泌,.freelarinicacid)为水溶性的多酚类化合物。1958年由Ellis首次从唇形科植物迷迭香(RosmarinusoffinalisL.)中分离得到.freelL,查肌酐值,明显高于正常值

3、(35～53μmol/L)者符合入选标准。1.2.2分组模型大鼠分为模型组和迷迭香酸组,未手术大鼠为对照组,每组6只。迷迭香酸组给予迷迭香酸100mg·kg-1·d-1灌胃,另2组给予等容积蒸馏水灌胃。8周后,留24h尿及心脏取血备查;切开腹腔,取出肾脏,4%甲醛缓冲液固定,石蜡包埋。另取部分肾组织，送电镜室检查。1.2.3免疫组织化学观察采用SABC法,按试剂盒说明书操作。高倍镜(×200)下随机选择20个肾小球和20个肾小管间质,根据染色面积和强度进行半定量评分:无染色或微弱染色为0，染色面积25%为1，25%～50%为2，50%～75%为3，75%为4;基本不着色为0,着色淡者(淡黄)

4、为1,适中者(棕黄)为2,深者(棕褐)为3。两者得分相加为最终值。1.2.4尿肌酐和血肌酐测定采用全自动生化分析仪(德国Becman公司)检测尿肌酐和血肌酐值,按公式换算成肌酐清除率:肌酐清除率=尿肌酐浓度(mg/mL)×1min尿量(mL)/血肌酐浓度(mg/mL)1.3统计学处理数据用x±s表示,采用SPSS11.0处理方差检验组间差异。组间两两比较采用LSD检验。2结果2.1免疫组织化学观测评分迷迭香酸可以抑制TGFβ1表达,减少Fn及ColⅣ在肾ECM沉积(表1)。2.2免疫组织化学改变与对照组比较,模型组Fn及ColⅣ表达明显增多,肾小球黄色及棕黄色、棕褐色面积大,着色深;迷迭

5、香酸组Fn及ColⅣ表达较对照组减少,黄色及棕黄色面积小,着色较浅。模型组TGFβ1表达较对照组明显增多,肾小管及间质黄色及棕黄色面积大,着色深;迷迭香酸组TGFβ1表达较对照组减少,黄色及棕黄色面积小,着色较浅(图1)。表1肾小球系膜细胞外基质及TGFβ1评分（略）Tab1TheeffectsofrosmarinicacidontheglomerularmesangiummatrixandTGFβ1n=6.Fn:纤维连接蛋白;ColⅣ:胶原Ⅳ;TGFβ1:转化生长因子β1.与模型组比较,☆:P0.05,☆☆:P0.01.Fn:纤维连接蛋白;ColⅣ:胶原Ⅳ;TGFβ1:转

6、化生长因子β1.A:对照组;B:模型组;C:迷迭香酸组.图1Fn、ColⅣ、TGFβ1表达(SABC法×200)（略）Fig1TheexpressionofFn,ColⅣandTGFβ1inthekidneys(SABC×200)2.3病理学改变光镜:模型组肾小球系膜细胞及系膜基质增生明显,有不同程度的萎缩、硬化,小球基底膜增厚,囊周纤维化,肾小管有扩张和萎缩,间质有大量炎症细胞浸润,伴纤维增生。迷迭香酸组系膜细胞及系膜基质增生程度和硬化程度较轻,基底膜较薄,肾小管扩张和萎缩改善,可见少量炎症细胞浸润(图1)。电镜:模型组系膜细胞增生及系膜基质增生、扩大明显,并有少量沉积物,内皮下大

7、量沉积物,上皮足突明显融合,结构紊乱;基底膜增厚,毛细血管壁增厚、萎陷;线粒体肿胀,溶酶体增多。迷迭香酸组系膜细胞及系膜基质增生程度较轻,足突结构基本正常,部分区域有轻度融合,基底膜增厚不明显(图2)。2.4血肌酐、内生肌酐清除率的变化迷迭香酸对大鼠血肌酐、内生肌酐清除率的影响见表2。3讨论3.1肾小球系膜细胞的细胞外基质在肾衰过程中的作用肾小球系膜细胞的ECM合成和降解的平衡对基质增生与否起关键