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1、甲钴胺注射液细菌内毒素检查法探究【摘要】目的建立甲钴胺注射液细菌内毒素检查方法。方法参照《中国药典》2005版(二)部附录细菌内毒素检查法及其原则进行实验。结果当甲钴胺注射液稀释至600倍(即浓度为0.000833mg/ml)时可消除对鲎试剂与细菌内毒素凝聚反应的干扰。结论甲钴胺注射液可用细菌内毒素检查法进行安全性质量检查。【关键词】甲钴胺注射液;细菌内毒素检查;鲎试剂;干扰试验StudyofBacterialEndotoxintestforMecobalaminInjectionXIEDong-mei.D
2、epartmentofPharmary,TheFirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,Bengbu,AnhuiProvince,Bengbu233004,China【Abstract】ObjectiveToestablishthebacterialendotoxintestinmecobalaminInjection.MethodsAccordingtotheCHP(2005Edt.),inhibitionorenhancementtestforbacte
3、rialendotoxintestwascarriedoutofsodiumbicarbonateinjection.ResultsTheinterferencecouldbeeliminatedwhenmecobalamininjectionwasdilutedby600times50.000833mg/ml.ConclusionBacterialendotoxintestcouldbeusedformecobalamininjection.【Keywords】Mecobalamininjection;B
4、acterialendotoxintest(BET);Tachypleusamebocytelysate(TAL);Interferencetest甲钴胺注射液(mecobalamininjection)是一种内源性的辅酶B12,易转移至神经细胞器,从而促进核酸和蛋白质的合成,促进轴索内输送和轴索的再生,促进正红母细胞的成熟,分裂,改善贫血血象等。目前国内尚未见甲钴胺注射液细菌内毒素方法的报道。本试验旨在探讨用鲎试剂(TAL)法检查甲钴胺注射液细菌内毒素的可行性。1试验材料1.1样品甲钴胺注射液3批,规格1
5、ml(0.5mg),批号080264A,080363A,080368A,生产厂家:日本卫材株式分社,分装厂家:卫材中国药业有限公司。1.2试剂鲎试剂:批号080730,规格0.1ml,λ=0.5EU/ml,湛江安度斯生物有限公司;批号0610170规格0.1ml:λ=0.25EU/ml湛江博康海洋生物有限公司。细菌内毒素工作标准品:批号2005-3,效价120EU规格1ml,中国药品生物制品检定所。细菌内毒素检查用水,以下简称(BET),批号0807150,规格5ml5/支湛江安度斯生物有限公司。1.3仪器
6、XW_80A旋涡混旋器,上海医科大学仪器厂;HH.214电热恒温水浴锅,江苏医疗器械厂。2试验方法与结果2.1鲎试剂灵敏度复核结果[1]按照《中国药典》2005版(二部)进行鲎试剂的标示灵敏度复核,结果见表1所示。2.2供试品内毒素理论限值(L)的确定及最大有效稀释浓度倍数MVD的计算[2]。2.2.1供试品内毒素理论限值(L)的确定本品临床使用每次1ml,1次/d,成人体质量按60kg计,人体致热阀(k)为5.0EU/(kg.h)则L=K/M=5.0EU.(kg•h)÷(1ml•m
7、l÷60kg)=300EU/ml。2.2.2最大有效稀释浓度倍数的计算MVD根据公式计算MVD=CL/λ计算。MVD(λ=0.5)=1.0ml•ml×300EU/ml÷0.5.EU/ml=600倍。MVD(λ=0.25)=1.0ml•ml×300EU/ml÷0.25.EU/ml=1200倍。注:湛江安度斯生物有限公司批号080730λ=0.5EU/ml2.3供试品干扰试验2.3.1干扰预试验为排除供试品本身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在干扰,取供试品批号为080363A的原液,
8、分别按表2,表3的所列的稀释倍数稀释,制成供试品溶液系列,并制备含2λ5内毒素的供试品稀释液(PPC)进行干扰预试验。同时作阳性和阴性对照。结果见表2和表3。注:湛江博康海洋生物有限公司批号0610170λ=0.25EU/ml由以上预干扰试验结果可以初步了解,两个厂家鲎试剂对甲钴胺注射液用细菌内毒素检查在600倍稀释即0.0008333mg/ml浓度时无干扰。2.3.2干扰确证试验为了最终确认是否存在干扰,进行以
