甘油果糖注射液细菌内毒素检查法的建立

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1、甘油果糖注射液细菌内毒素检查法的建立孟丽丽，张琳，叶琳，龚文明，邓骥【关键词】甘油果糖注射液；,,细菌内毒素；,,热原　　摘要：目的研究甘油果糖注射液细菌内毒素检查（BET）的干扰实验，建立用（BET）代替热原检查（PT）。方法根据《中国药典》2005年版Ⅱ部收载的细菌内毒素检查法的要求进行实验。结果将甘油果糖注射液经2倍稀释可消除干扰因素，用标示灵敏度为0.25EU・ml-1的鲎试剂检测细菌内毒素检查是有效的。结论可以用细菌内毒素检查法代替家兔法来控制甘油果糖注射液的质量。　　关键词：甘油果糖注

2、射液；细菌内毒素；热原　　Abstract：ObjectiveTostudytheinterferencefactorsofBETforglycerolandfructoseinjectionandestablishamethodforbacterialendotoxintest(BET)insteadofthepyrogenTest(PT).MethodsTheexperimentplementedaccordingtotheloacterialtestendotoxinsinChinaPhar

3、macopoeia(Ⅱ,2005ed).ResultsThetestshoentscouldbeexcludedbydilutingglycerolandfructoseinjection2times,anditebocytelysatel.ConclusionBacterialendotoxintestcanbeusedinplaceofrabbitmethodforpyrogenmonitorofglycerolandfructoseinjection.　　Keyl-1，规格0.1ml/支，批

4、号050715，厦门鲎试剂厂；灵敏度0.25EU・ml-1，规格0.1ml/支，批号050820，湛江安度斯生物有限公司。细菌内毒素工作标准品，10EU/支，批号050621，厦门鲎试剂厂。细菌内毒素检查用水（BET水），2ml/支，批号050110，厦门鲎试剂厂。甘油果糖注射液：250ml，批号051011，051203，051229，西安万隆制药有限公司。　　1.2仪器电热恒温水浴箱（江苏沙洲医疗器械厂）；旋涡混合器（上海沪西分析仪器厂）。实验用玻璃器皿经180℃烘烤2h以上。　　2方法与结果

5、〔1〕　　2.1样品细菌内毒素限值确定根据L=K/M，其中K=5.0EU・(kg・h)-1，它是细菌内毒素的致热阈；M为本品热原检查的兔剂量〔2〕10mg・kg-1，故L=KM=5/10=0.5EU・ml-1。　　2.2样品最大有效稀释倍数的确定市售TAL常用灵敏度（λ）在0.5EU・ml-1～0.03EU・ml-1范围内，根据MVD=λ/L得MVD0.5为1倍，MVD0.25为2倍，MVD0.03为16.7倍。　　2.3TAL灵敏度复核实验按《中国药典》2005年版Ⅱ部附录操作，对标示灵敏度为0

6、.25EU・ml-1的两批TAL进行复核。结果见表1。　　表1TAL灵敏度复核结果（略）　　表1结果表明，两批TAL灵敏度复核结果λc均在0.5～2.0λ（即0.125～0.5EU・ml-1）间，符合规定，可用于实验。　　2.4样品干扰预实验为排除甘油果糖注射液本身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在的干扰，分取供试品原液和1∶2，1∶4稀释液将细菌内毒素工作标准品稀释成2λ（0.5EU・ml-1）浓度，用λ=0.25EU・ml-1的TAL进行实验，同时做阳性和阴性对照。结果见表2。　　表2样品干

7、扰预实验结果（略）　　表2结果表明，甘油果糖注射液原液对TAL凝胶反应存在抑制作用，而1∶2，1∶4稀释液则无干扰。　　2.5样品干扰实验经预试，本品2倍稀释液对实验无干扰作用，故以2倍样品稀释液进行干扰实验。本文选用3个批号经热原检查合格的样品，用BET水将其2倍稀释，选用0.25EU・ml-1的鲎试剂，观察对实验有无干扰作用。按标准〔1〕规定，用BET水和2倍的样品稀释液将同一支细菌内毒素工作标准品分别制成含细菌内毒素2.0，1.0，0.5，0.25λ4种浓度的内毒素溶液，分别用上述两个厂家的

8、TAL观察样品在2倍浓度时对实验的干扰情况，每一浓度平行做4管，同时另取BET水和2倍样品稀释液各做两支阴性对照。结果见表3。　　表3样品（2倍稀释液）干扰实验结果（略）　　表3结果表明,Es，Et均在0.5～2.0λ范围内且Es与Et的比值在0.5～2.0范围内，说明3批样品经2倍稀释对不同厂家的TAL均无干扰作用。　　2.6样品细菌内毒素检查将3批样品分别用BET水稀释2倍浓度，用标示灵敏度为0.25EU・ml-1TAL（批号050715，050820）按《中国药典》2005年