地佐辛注射液细菌内毒素检查法探究

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1、地佐辛注射液细菌内毒素检查法探究　　【摘要】目的建立地佐辛注射液细菌内毒素检查方法。方法参照《中国药典》2010版（二）部附录细菌内毒素检查法及其原则进行实验。结果当地佐辛注射液稀释至100倍时可消除对鲎试剂与细菌内毒素凝聚反应的干扰。结论可以用细菌内毒素检查法对地佐辛注射液进行热原检查。【关键词】地佐辛注射液；细菌内毒素检查；鲎试剂；干扰试验地佐辛是一种强效阿片类镇痛药，能有效缓解术后疼痛，其镇痛强度、起效时间和作用持续时间与吗啡相当。当稳态血药浓度超过5～9ng/ml时，能较好的缓解术后疼痛，但是对阿片类镇痛药过敏的患者禁用。笔者通过研究，发现地佐辛注射液目前没有细菌内毒素检查法这方面

2、的研究。为了控制地佐辛注射液的质量和减少临床热原反应的发生，笔者参照有关文献[1，2]，对地佐辛注射液细菌内毒素检测方法进行了可行性试验，现总结如下。1试验材料1.1样品地佐辛注射液3批，规格1ml（0.5mg），批号13042721，1305162113062921，生产厂家：扬子江药业集团有限公司。51.2试剂鲎试剂：批号121206，规格0.1ml：λ=0.5EU/ml，湛江安度斯生物有限公司；批号130120，规格0.1ml：λ=0.25EU/ml，湛江博康海洋生物有限公司。细菌内毒素工作标准品：批号2012-3，效价120EU规格1ml，中国药品生物制品检定所。细菌内毒素检查用水

3、，以下简称（BET），批号1207150，规格5ml/支湛江安度斯生物有限公司。1.3仪器XW_80A旋涡混旋器，上海医科大学仪器厂；HH.214电热恒温水浴锅，江苏医疗器械厂。2试验方法与结果2.1鲎试剂灵敏度复核[3]按照《中国药典》2010版（二部）进行鲎试剂的标示灵敏度复核，结果见表1所示。2.2样品内毒素理论限值（L）的确定及最大有效稀释浓度倍数MVD的计算[3]。2.2.1样品内毒素理论限值（L）的确定本品临床使用每次最大剂量是20mg，成人体重按60kg计，人体致热阀（k）为5.0EU/（kg·h）则L=K/M=5.0EU·（kg·h）-1÷（20mg÷60kg）=15EU·

4、mg-1。2.2.2最大有效稀释浓度倍数的计算MVD根据公式计算MVD=CL/λ计算。MVD（λ=0.5）=5.0mg·ml-1×15EU·ml-1÷0.5EU·ml-1=150倍。5MVD（λ=0.25）=5.0mg·ml-1×15EU·ml-1÷0.25EU·ml-1=300倍。2.3样品干扰试验2.3.1干扰预试验为排除样品自身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在干扰，取样品批号为13042721的原液，分别按表2所列的稀释倍数稀释，制成样品溶液浓度系列，并制备含2λ细菌内毒素的样品稀释液（PPC）进行干扰预试验，同时作阳性和阴性对照。结果见表2。由干扰预试验可见，两个厂家鲎试剂对地

5、佐辛注射液用细菌内毒素检查在100倍稀释时无干扰。2.3.2干扰确证试验为了最终确定是否存在干扰，现进行以下正式干扰试验。取地佐辛注射液用细菌内毒素检查用水进行稀释100倍，按《中国药典》2010版（二部）附录细菌内毒素检查供试品干扰试验项进行试验，结果见表3。干扰试验表明，最大浓度2.0λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管均为阴性，用BET水和样品溶液制成的内毒素溶液的反应终点浓度几何平均值Es在0.5～2.0λ，Et在0.5～2.0Es范围内，说明样品在该浓度下对两批鲎试剂均无干扰，可进行细菌内毒素检查。2.4样品细菌内毒素检查取地佐辛注射液3批，5将原液1：100倍

6、稀释后用以上两批鲎试剂分别按《中国药典》2010版（二部）附录细菌内毒素检查法进行细菌内毒素检查，结果3个批号供试品的内毒素检查均符合规定，与家兔法检查一致。结果见表4。3讨论地佐辛注射液的原液对TAL凝聚反应存在干扰，通过预试验确证样品在1：100倍稀释时，对细菌内毒素检查无干扰作用。本法操作简单，精确度高，重现性好，因此本试验细菌内毒素法代替热原检查法是可行的[4]。通过本试验证明了地佐辛注射液的细菌内毒素检查法的可行性。本文通过干扰预试验确定样品的有效稀释倍数，再由干扰试验进一步验证，从而减少干扰试验的盲目性。用不同厂家的鲎试剂进行试验且结果相同，由此说明鲎试剂可以用于本品的细菌内毒

7、素检查。参考文献[1]蔡彤，张国来，李波，等.84种注射液药品细菌内毒素检查法的方法学研究.中国药学杂志，2010，45（2）：150-155.[2]朱勤.复合磷酸氢钾注射液的细菌内毒素检查法.安徽医药，2012，16（8）：1190-1192.[3]国家药典委员会.中国药典（二部）.北京：中国医院科技出版社，2010：附录99-102.5[4]王群，谢冬梅.阿扎司琼注射液的细菌内毒素检查法的探讨.安徽医药，2011，1