共培养体系中小鼠淋巴细胞rna编辑酶的表达论文

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1、共培养体系中小鼠淋巴细胞RNA编辑酶的表达论文孔亚林，窦科峰，张洪涛，冯全新，张福琴，赵青川【关键词】共培ExpressionofRNAeditaseofmouselymphocytesinacoculturesystem【Abstract】AIM:TostudytheexpressionofRNAeditaseofmouselymphocytesundertheeffectofheterogeneousantigeninacoculturesystemofmousespleencellsandhumanlivercancercellsandtoobs

2、ervetherelationbetphocytesbytheuseofFK506.METHODS:Spleencellsof1,2,4,6,8,10,12,16,20and24hinthecoculturesystemiquantitativePCRandousespleencellsinasingleculturesystem.ThemousemodelmunesystemrestrainedbyFK506ade,itsspleencellsulatedcellsandthentheeffectofFK506onRNAexpressionofedi

3、taseiquantitativePCR.RESULTS:①Thelymphocytesurvivalrateainedataparativelyloeulatedbyheterogeneousantigenandtheexpressionlevelisrelatedmunosuppressiveagents【摘要】目的：通过小鼠脾细胞与人肝细胞肝癌细胞共培养，了解在异种抗原刺激下小鼠淋巴细胞RNA编辑酶表达的变化；并且通过免疫抑制药FK506的应用，观察RNA编辑酶与淋巴细胞功能状态的联系.方法：观察共培养1.freelinaseactingonRN

4、A,ADAR）对前RNA特异位点修饰，使腺嘌呤核苷转为次黄嘌呤核苷（Adenosioinosine，AtoI）.除了传统的蛋白翻译途径外，RNA编辑可产生蛋白的同功异构体，接受编辑后的RNA翻译产物可能会与基因组编码的基因产物有所不同，从而在蛋白质多样性的形成中发挥重要的作用.哺乳类目前已经克隆到4种RNA编辑酶［2-3］，即ADAR1，ADAR2，ADAR3，ADATs，它们具有相似的催化结构域.近年来对AtoIRNA编辑的研究多局限于中枢系统，而对ImRNA含量丰富的众多外周组织中的AtoIRNA编辑情况的研究进展较慢.我们通过研究小鼠淋巴细胞在异

5、种抗原细胞的刺激下和FK506的抑制下ADAR1的表达情况，了解ADAR1与淋巴细胞功能状态之间的关系.1材料和方法1.1材料人肝细胞肝癌细胞（HCC）由第四军医大学西京医院肝胆外科实验室保存，BALB/c小鼠30只购自第四军医大学实验动物中心，体质量22~25g，雌雄不限；淋巴细胞分离液购自上海华精生物高科技有限公司，反转录试剂盒和PCR试剂为Toyobo公司产品，细胞培养采用100mL/L小牛血清DMEM溶液（Gibco公司产品）.1.2方法1.2.1刺激细胞的制备将HCC细胞复苏后培养并传代，调整细胞密度至1×108个/L，把细胞转移至24孔板中

6、，每孔细胞数目大约为105个，培养24h，使细胞贴壁.1.2.2淋巴细胞的分离将小鼠断头处死，无菌条件下取出脾组织，用DHanks液冲洗1次，含青霉素、链霉素的双抗溶液冲洗1次，在器皿中磨碎后由不锈钢纱网过滤，将过滤得到的液体以1∶1的比例与淋巴细胞分离液混合，2000r/min离心25min后液体分为3层，取中间云雾状细胞层，DHanks液洗1遍，将细胞重悬于含100mL/L小牛血清的DMEM培养基中，计数后将细胞密度调整为1×109个/L.1.2.3免疫抑制小鼠淋巴细胞的制备将小鼠在清洁环境下饲养，按照1mg/（kgd）的药量，给小鼠灌服FK506

7、，持续7d，按照上述方法分离淋巴细胞，调整细胞密度至1×109个/L.1.2.4分组和共培养体系的建立实验设对照组、实验组和免疫抑制组，每组各10只小鼠.取培养有HCC的24孔板，实验组是将淋巴细胞与刺激细胞按10∶1比例依次混合至A到J孔中，免疫抑制组是将免疫抑制小鼠淋巴细胞与刺激细胞按10∶1比例混合至a到j孔中，轻轻吹吸5min使两种细胞充分接触，对照组是把相同数目的正常淋巴细胞取10份，转移至空白的24孔板中培养，编号1到10.将所有细胞在37℃，50mL/LCO2的孵箱中培养，分别在1，2，4，6，8，10，12，16，20及24h时每组随机

8、取1孔，收集其中脾细胞,.freelin，94℃变性45s，56℃退火55s，72℃延伸90s