共培养体系中小鼠淋巴细胞rna编辑酶的表达

《共培养体系中小鼠淋巴细胞rna编辑酶的表达 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、共培养体系中小鼠淋巴细胞RNA编辑酶的表达孔亚林，窦科峰，张洪涛，冯全新，张福琴，赵青川【关键词】共培ExpressionofRNAeditaseofmouselymphocytesinacoculturesystem【Abstract】AIM:TostudytheexpressionofRNAeditaseofmouselymphocytesundertheeffectofheterogeneousantigeninacoculturesystemofmousespleencellsandhumanlivercancer

2、cellsandtoobservetherelationbetphocytesbytheuseofFK506.METHODS:Spleencellsof1,2,4,6,8,10,12,16,20and24hinthecoculturesystemiquantitativePCRandousespleencellsinasingleculturesystem.ThemousemodelmunesystemrestrainedbyFK506ade,itsspleencellsulatedcellsandthentheeffec

3、tofFK506onRNAexpressionofeditaseiquantitativePCR.RESULTS:①Thelymphocytesurvivalrateainedataparativelyloeulatedbyheterogeneousantigenandtheexpressionlevelisrelatedmunosuppressiveagents【摘要】目的：通过小鼠脾细胞与人肝细胞肝癌细胞共培养，了解在异种抗原刺激下小鼠淋巴细胞RNA编辑酶表达的变化；并且通过免疫抑制药FK506的应用，观察RNA编辑酶

4、与淋巴细胞功能状态的联系.方法：观察共培养1，2，4，6，8，10，12，16，20及24h的小鼠脾细胞，用半定量PCR的方法检测RNA编辑酶表达的变化，并以相同时段单独培养的小鼠脾细胞RNA编辑酶的表达情况进行对照；制备免疫功能受FK506抑制的小鼠模型，取其脾细胞与刺激细胞进行相同时段的共培养，用半定量PCR的方法检测FK506对脾细胞RNA编辑酶的影响.结果：①各组淋巴细胞的活细胞率24h内都能达到70%；②共培养组RNA编辑酶的表达呈降低后升高、再降低的趋势，对照组呈一直降低、至12h后维持在较低的水平；③FK50

5、6对RNA编辑酶的表达呈现明显的抑制，与共培养组和对照组相比，这种抑制随着共培养时间的延长而减弱.结论：脾细胞RNA编辑酶在异种抗原的刺激下表达活跃，其表达的高低与脾细胞的功能状态有关.【关键词】脾细胞；共培养；RNA编辑酶；PCR；FK506;免疫抑制剂0引言RNA编辑是近年来发现的转录后修饰过程〔1〕，它通过RNA编辑酶（adenosinedeaminaseactingonRNA,ADAR）对前RNA特异位点修饰，使腺嘌呤核苷转为次黄嘌呤核苷（Adenosioinosine，AtoI）.除了传统的蛋白翻译途径外，RNA

6、编辑可产生蛋白的同功异构体，接受编辑后的RNA翻译产物可能会与基因组编码的基因产物有所不同，从而在蛋白质多样性的形成中发挥重要的作用.哺乳类目前已经克隆到4种RNA编辑酶〔2-3〕，即ADAR1，ADAR2，ADAR3，ADATs，它们具有相似的催化结构域.近年来对AtoIRNA编辑的研究多局限于中枢系统，而对ImRNA含量丰富的众多外周组织中的AtoIRNA编辑情况的研究进展较慢.我们通过研究小鼠淋巴细胞在异种抗原细胞的刺激下和FK506的抑制下ADAR1的表达情况，了解ADAR1与淋巴细胞功能状态之间的关系.1材料和方

7、法1.1材料人肝细胞肝癌细胞（HCC）由第四军医大学西京医院肝胆外科实验室保存，BALB/c小鼠30只购自第四军医大学实验动物中心，体质量22~25g，雌雄不限；淋巴细胞分离液购自上海华精生物高科技有限公司，反转录试剂盒和PCR试剂为Toyobo公司产品，细胞培养采用100mL/L小牛血清DMEM溶液（Gibco公司产品）.1.2方法1.2.1刺激细胞的制备将HCC细胞复苏后培养并传代，调整细胞密度至1×108个/L，把细胞转移至24孔板中，每孔细胞数目大约为105个，培养24h，使细胞贴壁.1.2.2淋巴细胞的分离将小鼠

8、断头处死，无菌条件下取出脾组织，用DHanks液冲洗1次，含青霉素、链霉素的双抗溶液冲洗1次，在器皿中磨碎后由不锈钢纱网过滤，将过滤得到的液体以1∶1的比例与淋巴细胞分离液混合，2000r/min离心25min后液体分为3层，取中间云雾状细胞层，DHanks液洗1遍，将细胞重悬于含100mL/L小牛血清