资源描述：
《重组结核分枝杆菌mr 38 000蛋白的表达、纯化和鉴定的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、重组结核分枝杆菌Mr38000蛋白的表达、纯化和鉴定的论文摘要从h37rv基因组中扩增mr38000蛋白基因并高效表达和纯化。用pcr技术从结核分枝杆菌h37rv基因组中扩增mr38000蛋白序列，将其与pgem-t-easy载体连接转化e.colidh5α，构建重组克隆载体pgem-t-easy/mr38000，测序正确后将目的基因片断克隆入pqe-80l原核表达载体并转化e.colidh5α，iptg诱导目的蛋白表达。经r38000蛋白基因，测序结果与gebank中报道的完全一致。sds-page显示，在mr为38.5×103处有相应的蛋白质表达条带，
2、r38000蛋白序列，并在e.colidh5α高效表达，亲和层析后获得了纯化目的蛋白。关键词mr38000蛋白;表达;纯化;结核分枝杆菌；cloning,expressionandpurificationofmr38000proteinfrommycobacteriumtuberculosiszhangming，lijin-cheng，linhang(departmentofinternalneurology,2.emergencydepartment,thefuzhougeneralhospital,fuzhou,350025,p.r.china)[ab
3、stract]toobtainmycobacteriumtuberculosismr38000proteinfromh37rv-dna,expressefficientlyine.coliandpurifythemr38000proteins.mr38000proteingeneplifiedbypcrfromthegenomeofh37rvandclonedintopgem-t-easyvector.aftersequenced,mr38000proteingeneedigestion,namedpqe-80l-mr38000.theplasmidpqe
4、-80l-mr38000edintoe.colidh5αandinducedbyiptg.mr38000proteinexpressionedbyice-specificmabagainst(his)6.mr38000proteingener38000vectorexpressedproteinoleculeab.theexpressedproteincouldbepurifiedbyni-ntasystemkitr38000proteingenehadbeensuccessfullyclonedandefficientlyexpressedine.col
5、i,theresultsestablishedthebasisforfurtherstudyofthefunctionofmr38000protein.[keyr38000protein;expression;purification;mycobacteriumtuberculosis(mtb)结核分枝杆菌（mycobacteriumtuberculosis,mtb）是结核病(tuberculosis,tb)的病原体。.其在患者体内主要为细胞内生长。诊断方法的欠缺是结核病流行的重要原因。目前常用的ppd试验，常使bcg疫苗接种者被误检为阳性[1]，且对后期
6、结核患者敏感性较低，存在明显不足。近年来，有研究发现mr38000蛋白具有强的免疫原性，而成为结核分枝杆菌抗原的研究热点[2,3]，可能成为结核病血清学诊断试剂和疫苗研究的候选抗原之一。为此，我们在原核表达载体中表达结核分枝杆菌mr38000蛋白并对其进行了纯化，为进一步研究其抗原性和主要功能提供方便。１材料和方法1.1材料mtb毒株h37rv、dh5α由本室保存;pgem-t-easy及购自promega公司；x-gal，限制性内切酶bamhⅰ,ecorⅰ及t4-dna连接酶，taqdna聚合酶均为takara公司产品；iptg,dtt,dte,小量质粒
7、提取试剂盒均为sigma公司产品，胶回收试剂盒为vitagene公司产品。1.2方法1.2.1引物的设计与合成根据已发表的mtbh37rv全基因组mr38000蛋白基因序列设计引物。上游引物p1:5’-aggggatccgcgaaaattcgtttgcatacgct-3’，含bamhⅰ酶切位点和起始密码子，下游引物p2:5’-gatgaattcacggaggttgctgtcgcgtggtg-3’中加入ecorⅰ酶切位点。引物由上海生工生物技术有限公司合成。1.2.2mr38000片段的扩增取保存于改良罗氏培养基的mtbh37rv接种于7h9液体培养基，37
8、℃间或振荡培养2~3l液体培养物的菌体沉淀重悬于50μl裂解液（1
